現(xiàn)貨供應(yīng):AtT-20細(xì)胞,小鼠垂體瘤價(jià)格產(chǎn)品經(jīng)無數(shù)次市場(chǎng)驗(yàn)證,若出現(xiàn)質(zhì)量問題(非人為的)可無條件換貨或退貨,詳細(xì)信息:
規(guī)格:70%密度的25cm2培養(yǎng)瓶的細(xì)胞一瓶
特點(diǎn):細(xì)胞代數(shù)為4-5代左右
細(xì)胞檢測(cè):細(xì)胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌
收到“AtT-20細(xì)胞,小鼠垂體瘤價(jià)格”后應(yīng)如何去正確的處理:
您需要準(zhǔn)備好細(xì)胞所要用到的培養(yǎng)基和相關(guān)試劑,雖然所有的貼壁,半貼壁或者懸浮細(xì)胞處理方式差不多,但是不同的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)條件和處理力度還有試劑的批間差這些問題存在,也會(huì)導(dǎo)致對(duì)細(xì)胞處理不當(dāng),或者環(huán)境的不適應(yīng)而造成細(xì)胞的死亡。
1) 收到細(xì)胞,*時(shí)間要鏡檢:觀察細(xì)胞形態(tài)是否正常,對(duì)于貼壁細(xì)胞則要注意看貼壁情況是否很好,觀察細(xì)胞密度,有疑議及時(shí)咨詢提供細(xì)胞的技術(shù)人員。由于運(yùn)輸?shù)?時(shí)間或者溫度的變化,很多貼壁細(xì)胞在盛滿培養(yǎng)基的瓶子里生長(zhǎng)的狀態(tài)和平時(shí)會(huì)有點(diǎn)不一樣,主要是貼壁牢固問題。比如293T,平時(shí)貼壁就不是很牢,在裝滿的 培養(yǎng)基瓶子里面,會(huì)發(fā)生大片的脫落,細(xì)胞聚集在一起,但是細(xì)胞生長(zhǎng)還是正常的,通過離心收集,加以*的消化,重新打散,又可以正常的貼壁生長(zhǎng)。
2) 當(dāng)通過上一步的觀察,細(xì)胞初步?jīng)]有任何問題時(shí),進(jìn)行下一步操作。當(dāng)收到的細(xì)胞密達(dá)到80%左右時(shí),則處理如下:棄除瓶中大部分培養(yǎng)基,僅保留5到10mL 培養(yǎng)所需的常規(guī)培養(yǎng)基;或更換新鮮的培養(yǎng)基,置于培養(yǎng)箱中,隨后每天觀察。細(xì)胞在低于正常生長(zhǎng)溫度情況下,會(huì)調(diào)整為靜止期,或者慢速生*,必須恢復(fù)37 度的環(huán)境至少3個(gè)小時(shí)左右,才能重新調(diào)整到接近對(duì)數(shù)生*的狀態(tài),在對(duì)數(shù)生*進(jìn)行細(xì)胞的傳代會(huì)大大增加傳代的成功率,和細(xì)胞的存活率。
3)如果經(jīng)*步觀察發(fā)現(xiàn)“”密度超過90%,并且細(xì)胞狀態(tài)很好時(shí),則復(fù)溫后2個(gè)小時(shí)需要立即傳代。傳代的比例應(yīng)依據(jù)不同的細(xì)胞而定。對(duì)于生長(zhǎng)比較快,狀態(tài)穩(wěn)定,不易受外界影響的細(xì)胞 可 以一次多傳幾瓶;對(duì)于生長(zhǎng)較慢,細(xì)胞比較薄,狀態(tài)容易波動(dòng)的細(xì)胞類型,一次少傳些,保證每瓶細(xì)胞密度大些,便于穩(wěn)定生長(zhǎng)。至于一些比較陌生的細(xì)胞,*次 處理也可以依照第二種情況。
售后:收到細(xì)胞后7天,如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有質(zhì)量問題(如污染,死亡,快遞運(yùn)輸?shù)仍颍r(shí),應(yīng)出具書面質(zhì)量問題報(bào)告并及時(shí)傳真或致銷售人員,我們將盡快為您解決。
操作方法
固定 | 培養(yǎng)細(xì)胞的制片或冰凍切片用4%多聚甲醛固定30min(4℃)后,用80%酒精再固定2h(-20℃)。常規(guī)4%中性福爾馬林固定、石蠟包埋之切片進(jìn)行脫蠟、水化。 |
洗滌 | 玻片浸入PBS緩沖液,搖床上洗滌5min,三次。 |
反應(yīng) | 洗滌后的玻片用吸水紙吸干細(xì)胞或組織周圍水分,按50μl/cm2滴加反應(yīng)液(每50μL反應(yīng)液含TdT酶0.5μL,標(biāo)記的-dUTP 1μL),使反應(yīng)液均勻地覆蓋于所有細(xì)胞或組織切片上,蓋上塑料蓋玻片,置濕盒中,37℃孵育1h。 |
終止反應(yīng) | 去掉塑料蓋玻片,將玻片置盛有洗滌緩沖液的染色缸內(nèi),洗滌兩次,每次5min。 |
FITC標(biāo)記 | 洗滌后的玻片用吸水紙吸去細(xì)胞或組織周圍水分,按50μl/cm2滴加FITC反應(yīng)液(含FITC 2.5μg/mL),室溫下避光孵育10min。 |
洗滌 | 將玻片置于洗滌緩沖液內(nèi),洗兩次,每次5min。 |
PI復(fù)染 | 將玻片置于盛有PI染液的染色缸內(nèi),室溫下避光染色30min。 |
封片 | 用蓋玻片直接蓋在含PI染液的玻片上,亦可用無色指甲油涂于蓋玻片四周邊緣,置暗盒中,盡早鏡檢觀察。 |
交貨時(shí)間 | 10~15天 |
客戶須知(對(duì)材料的要求、注意事項(xiàng))
結(jié)果提供:正常和陽(yáng)性對(duì)照玻片及其1張數(shù)碼照片,剩余石蠟塊,檢測(cè)報(bào)告;
樣本要求:取材保持組織新鮮(組織塊以小于2cm×1.5cm×0.3cm為宜),立即放入固定液中(固定液用10%福爾馬林液或4%多聚甲醛緩沖液,體積為組織塊的10倍以上),避免干燥;對(duì)于有血跡的樣本,可用PBS液或生理鹽水沖洗后直接放入固定液中;經(jīng)固定后的樣本必須在48小時(shí)內(nèi)處理。
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