德國Lavision Biotec 雙光子熒光顯微鏡TriM Scope
雙光子吸收/激發(fā)技術(shù)的原理：
在強光激發(fā)下，分子同時吸收兩個光子，從基態(tài)躍遷到兩倍光子能量的激發(fā)態(tài)的過程。兩個光子可以是相同波長的，也可以是不同波長的，但必須是同時吸收（兩個光子到達被激發(fā)分子的時間間隔小于1飛秒）。可以這樣理解，先吸收一個光子的能量躍遷到一個虛擬的中間態(tài)，然后再吸收一個光子的能量躍遷到激發(fā)態(tài)。
LaVision BioTec的雙光子顯微鏡TriM Scope的優(yōu)勢（同類產(chǎn)品中的優(yōu)點）:
☆ 的多光束快速掃描模式：用戶可根據(jù)需要調(diào)節(jié)光束模式從傳統(tǒng)的單光束掃描模式到La Vision BioTec的多光束快速掃描模式，即1、2、4、8、16、32、64束光的不同模式選擇。多光束平行掃描技術(shù)是指入射光經(jīng)過分光器，分解為64束光，同時進入顯微鏡，通過物鏡聚焦在樣品上，通過XY掃描器利用這64束光同時進行掃描，并調(diào)整Z軸進行三維成像，保證的樣品損傷的同時極大地提高了掃描速度。
☆ 一個可用軟件調(diào)節(jié)的雙光子顯微鏡：ImSpector Pro軟件支持了*的掃描模式，并且支持用戶在ms毫秒之內(nèi)切換掃描區(qū)域。因此，TriM Scope 是研究光活化、光釋放和光漂白（photo activation, uncaging and FRAP ）的理想工具。
☆ 同類產(chǎn)品中具有的檢測效率：TriM Scop可以支持最多達8個 non-descanned PMT, NDD可以是cooled generation III GaAsP PMT或者APD detector可以多傳輸40%效率的量子，比同類產(chǎn)品具備更佳的檢測效率。
☆ 世界上能夠支持OPO技術(shù)的顯微鏡：OPO技術(shù)– 紅光和蛋白的激發(fā)：經(jīng)典的Ti:Sa激光器成像紅光的能力是非常有限的，因為經(jīng)典的激發(fā)波長是1125到1250 nm, 并不在Ti:Sa激光器的轉(zhuǎn)換范圍之類。OPO技術(shù)解決了這個問題，因為它能傳輸可調(diào)的fs激光脈沖到>1100 nm的范圍。
雙光子顯微鏡相對于共聚焦等其他顯微鏡的優(yōu)點：
☆ 光損傷小：由于雙光子顯微鏡使用的是可見光或近紅外光作為激發(fā)光源，這一波段的光對活體細胞和組織的光損傷小，適用于長時間的研究；
☆ 穿透能力強：相對于紫外光，可見光和近紅外光都具有更強的穿透能力，因而受生物組織散射的影響更小，解決對生物組織中深層物質(zhì)的層析成像研究問題；研究表明，共聚焦熒光成像的成像深度一般在50微米左右，而雙光子顯微鏡的成像深度可達1000微米；
☆ 高分辨率：由于雙光子吸收截面很小，只有在焦平面很小的區(qū)域內(nèi)可以激發(fā)出熒光，雙光子吸收僅局限于焦點處的體積約為波長3次方的范圍內(nèi)；
代雙光子顯微鏡：LaVision BioTec革新的技術(shù)提供了的雙光子顯微鏡-TriM Scope I：
☆ 用戶可根據(jù)需要調(diào)節(jié)光束模式：從傳統(tǒng)的單光束掃描模式到La Vision BioTec的多光束快速掃描模式，即1、2、4、8、16、32、64束光的不同模式選擇。快速掃描模式即可保證可允許64束光同時掃描，并且保證的樣品損傷，主要有下面三個原因:
? 64束光能夠提供單光束的64倍熒光強度并且保證低損傷高熒光強度
? 保證了高的幀速率
? CCD攝像頭比PMTs更高靈敏度
☆ TriM Scope 可以提供最多達8個NDD攝像頭給經(jīng)典的單光束掃描顯微鏡，2個CCD攝像頭，1個TCSPC 探測器為FILM（Fluorescence Lifetime Imaging Microscope ）測量。3 個NDD可以安裝到靠近物鏡的位置，2個 NDD可以插入到傳送器。
☆ LaVision BioTec的ImSpector Pro軟件支持了*的掃描模式，并且支持用戶在ms毫秒之內(nèi)切換掃描區(qū)域。因此，TriM Scope 是研究光活化、光釋放和光漂白（photo activation, uncaging and FRAP ）的理想工具。
☆ TriM Scope 還可以結(jié)合1個OPO使用，OPO可以轉(zhuǎn)換Ti:Sa激光器的波長從800-880 nm轉(zhuǎn)變到1100-1300 nm。因此紅光染料或者蛋白質(zhì)可以被有效地激發(fā)出雙光子，保證了很低的漂白率和最深的穿透深度。LaVision BioTec可以同時使用Ti:Sa激光和OPO來掃描，就能同時激發(fā)出綠/黃和紅光。
