5637膀胱癌細胞上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標準胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術(shù)檢測樣品制備方法
直接標記抗體(FITC標記抗體)5637膀胱癌細胞:
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。[2]
未標記抗體間接免疫熒光標記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復一次。
(5)加入熒光標記(FITC)標記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調(diào)整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
// Tca-8113(舌鱗癌細胞) ATCC 株 詢價
// HCC 94 [HCC941122](子宮鱗癌細胞(高分化)) ATCC 株 詢價
CRL-1555 A-431(表皮癌細胞) ATCC 株 詢價
CCL-2.1 HeLa 229(宮頸癌細胞) ATCC 株 詢價
// CBRH-7919(肝癌細胞) ATCC 株 詢價
// RH-35(肝癌細胞) ATCC 株 詢價
// SHZ-88(乳腺癌細胞) ATCC 株 詢價
CRL-2065 MLTC-1(睪丸間質(zhì)細胞瘤細胞) ATCC 株 詢價
// L6565(小鼠L6565白血病克隆細胞系) ATCC 株 詢價
CRL-1720 F9(畸胎瘤細胞) ATCC 株 詢價
// LLC Lewis(肺癌細胞) ATCC 株 詢價
CRL-1804 C127(乳腺腫瘤細胞) ATCC 株 詢價
// MFC(胃癌細胞) ATCC 株 詢價
CRL-6322 B16(黑色素瘤細胞) ATCC 株 詢價
TIB-64 P815(肥大細胞瘤細胞) ATCC 株 詢價
CCL-8 S-180(腹水瘤細胞) ATCC 株 詢價
// RM-1(前列腺癌細胞) ATCC 株 詢價
// SAC-IIC3(腹水瘤細胞) ATCC 株 詢價
HB-12317 NG108-15 [ 108CC15 ](小鼠神經(jīng)細胞瘤與大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤之融合細胞) ATCC 株 詢價
// SAC-IIB2(腹水瘤細胞) ATCC 株 詢價
CRL-1830 Hepa 1-6(肝癌細胞) ATCC 株 詢價
CCL-46 P388D1(淋巴瘤細胞) ATCC 株 詢價
CRL-1580 P3X63Ag8.653(骨髓瘤細胞) ATCC 株 詢價
TIB-160 YAC-1(淋巴瘤細胞) ATCC 株 詢價
TIB-9 P3X63Ag8(骨髓瘤細胞) ATCC 株 詢價
TIB-181 EL4. IL-2(淋巴瘤細胞) ATCC 株 詢價
// SP2/0(骨髓瘤細胞) ATCC 株 詢價
TIB-39 EL4(淋巴瘤細胞) ATCC 株 詢價
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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