RD惡性胚胎橫紋肌瘤細(xì)胞上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級(jí)胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級(jí)胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測(cè)樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體RD惡性胚胎橫紋肌瘤細(xì)胞):
(1) 收集1×106個(gè)細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個(gè)細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測(cè)即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個(gè)細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測(cè)。
(7)流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測(cè)樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時(shí)。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
1'-METHYL-5-[[2'-METHYL-4'-(5-METHYL-1,2,4-OXADIAZOL-3-YL)BIPHENYL-4-YL]CARBONYL]-2,3,6,7-TETRAHYDROSPIRO[FURO[2,3-F]INDOLE]-3,4'-PIPERIDINE HYDROCHLORIDE SB 224289 HCL 180083-23-2
1-Methylcaffeine 1,3,7,8-四甲基黃嘌呤 832-66-6
1-Methylcyclopentene 1-甲基環(huán)戊烯 693-89-0
1-Methylcyclopropene the sMallest packing size X 1
Trehalulose 1-O-Α-D-吡喃葡萄糖基-D-呋喃果糖 51411-23-5
1-Octanol 正辛醇 111-87-5
1-oxo-2,8-diazaspiro[4.5]decane-8-carboxylate 1-氧代-2,8-二氮雜螺[4,5]癸烷-8-甲酸叔丁酯 268550-48-7
2-oleoyl-1-palMitoyl-sn-glycero-3-phosphoCholine 2-油酰-1-棕櫚錫ganyou-3-磷酸* 26853-31-6
1-PalMitoyl-Sn-glycero-3-phosphoethanolaMine 53862-35-4
gaMMa Methyl Benzene pentanol γ-甲基苯戊醇 55066-48-3
1-Penten-3-Yne 646-05-9
英文名稱 中文名稱 CAS號(hào)
1-Boc-2-cyanopiperidine 1-Boc-2-氰基哌啶 153749-89-4
1-Boc-3-(AMino)azetidine 1-叔丁氧羰基-3-胺基環(huán)丁胺 193269-78-2
1-Boc-3-(hydroxy)azetidine N-Boc-3-羥基氮雜環(huán)丁烷 141699-55-0
1-Boc-3,3-diMethylpiperazine 3,3-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯 259808-67-8
1-Boc-3-aMinoMethyl-piperidine 1-Boc-3-氨甲基哌啶 162167-97-7
1-boc-3-azetidinone 1-Boc-3-氮雜環(huán)丁酮 398489-26-4
1-Boc-4-ethynylpiperidine 1-Boc-4-乙炔基哌啶 287192-97-6
1-Boc-4-piperidylacetic acid 1-叔丁氧羰基-4-哌啶乙酸 157688-46-5
1-Boc-piperidine-3-carboxylic acid N-Boc-3-哌啶甲酸 84358-12-3
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來(lái),移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時(shí)后.再放入-80度冰箱過(guò)夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時(shí)間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時(shí)。不能超過(guò)1小時(shí)。zui后放入-80度冰箱過(guò)夜。第二天放入液氮中。
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