P3X63Ag8骨髓瘤細(xì)胞上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體)P3X63Ag8骨髓瘤細(xì)胞:
(1) 收集1×106個細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測。
(7)流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
Clozolinate 乙菌利 84332-86-5
5-BROMOCYTIDINE 3066-86-2
DL-GOITRIN DL-甲狀腺腫素 13190-34-6
(R)-Carbonochloridic acid 1-azabicyclo[2.2.2]oct-3-yl ester (R)-氯甲酸異丙酯 1-氮雜雙環(huán)[2,2,2]辛-3-基酯 201660-37-9
MelaMine polyphosphate 磷酸三聚氰胺 20208-95-1
Bromoacetaldehyde diethyl acetal 2-溴-1,1-二乙氧基乙烷 2032-35-1
4-Chloro-2-mercaptobenzoic acid 20324-49-6
2-(1,1-DiMethylethyl)-6-Methyl-4-[3-[[2,4,8,10-tetrakis(1,1-diMethyleth yl)dibenzo[d,f][1,3,2]dioxaphosphepin-6-yl]oxy]propyl] phenol 2-(叔丁基)-6-甲基-4-(3-((2,4,8,10-四(叔丁基)二苯并[D,F][1,3,2]二惡磷環(huán)庚烷-6-基)氧)丙基)* 203255-81-6
4-Methoxy-N-(4-Methoxyphenyl)-N-phenylbenzenaMine 4,4'-二甲氧基三苯胺 20440-94-2
Encecalin 英西卡林 20628-09-5
1-(tert-butyl)pyrrolidin-2-one N-特丁基-2-吡咯烷酮 20687-53-0
2-Ethylhexyl 4-diMethylaMinobenzoate 對二甲氨基苯甲酸異辛酯 21245-02-3
YohiMbine HCL 鹽酸育亨賓 65-19-0
YttriuM 2-ethylhexanoate 2-乙基己酸釔 103470-68-4
Z-11-HEXADECENAL 順-11-十六烷烯醛 53939-28-9
Zafirlukast 扎魯司特 107753-78-6
ZANAMIVIR HYDRATE *(抗流感藥) 139110-80-8
Z-D-Phe-OH N-芐氧羰基-D-苯* 2448-45-5
Zearalenone 玉米烯酮 17924-92-4
ZEIN FROM CORN 玉米朊 9010-66-6
ZEOLITE, HS-320, HYDROGEN Y 308081-05-2
ZSM-5 沸石 308081-08-5
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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