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EBTr NBL-4牛胚氣管細胞

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所在地上海市

更新時間:2017-03-22 23:32:50瀏覽次數(shù):250次

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EBTr NBL-4牛胚氣管細胞 上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標準胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術檢測樣品制備方法
直接標記抗體(FITC標記抗體)EBTr NBL-4牛胚氣管細胞
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞 ,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。[2]
未標記抗體間接免疫熒光標記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復一次。
(5)加入熒光標記(FITC)標記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調(diào)整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。

其他*產(chǎn)品:
Trilaurin ganyou三酯 538-24-9
Trilon "A"  80751-51-5
TriMellitic acid trialkyl (C7-C9) ester  68515-60-6
triMetaphan caMsilate 樟磺咪芬 68-91-7
TriMethobenzaMide 曲美芐胺 138-56-7
TRIMETHOBENZAMIDE HYDROCHLORIDE 鹽酸*氧苯酰胺 554-92-7
TRIMETHOXYSILYLPROPYL MODIFIED POLYETHYLENIMINE  136856-91-2
TRIMETHYL 4-HYDROXYORTHOBENZOATE *基 4-羥基ORTHO苯甲酸酯 27689-95-8
TRIMETHYL-(2-PHENYL-CYCLOHEX-1-ENYLOXY)-SILANE  53723-93-6
triMethyl(trichlorosilyl)silane  18026-87-4
TRIMETHYLAMINE ALANE  50981-97-0
TRIMETHYLBOROXINE *基環(huán)三硼氧烷 823-96-1
triMethyloleylaMMoniuM chloride  10450-69-8
TRIMETHYLOLPROPANE MONOALLYL ETHER *基丙烷單烯丙酯 682-11-1
TriMethylphenylaMMoniuM chloride 苯基*基氯化銨 138-24-9
TriMethylpyruvic Acid *基丙酮酸 815-17-8
TriMethylsilyl benzenesulphonate *基硅基苯磺酸酯 17882-06-3
TriMethylsilyl 2-(fluorosulfonyl)difluoroacetate *基硅烷基 120801-75-4
TriMethylsilyl Cyanide *基氰硅烷 7677-24-9
TRIMETHYLSILYL POLYPHOSPHATE *基硅多磷酸鹽 40623-46-9
TriMethylurea *基脲 632-14-4
TriMyristin ganyou三肉豆蔻酸酯 555-45-3
TRI-N-BUTYL PHOSPHATE 磷酸三丁酯 126-73-8
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則  慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。

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