MDBK NBL-1牛腎細(xì)胞 上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級(jí)胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級(jí)胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測(cè)樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體)MDBK NBL-1牛腎細(xì)胞:
(1) 收集1×106個(gè)細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個(gè)細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測(cè)即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個(gè)細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測(cè)。
(7)流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測(cè)樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時(shí)。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
TMSOTF 三氟甲磺酸*基硅酯 27607-77-8
Tocofersolan 托可索侖 9002-96-4
Tocopherol 維生素 E 1406-18-4
Tocopherol (Vit.E) succinate (D-alfa) 天然*琥珀酸酯
TOFA (5-(Tetradecyloxy)-2-furoic acid) 54857-86-2
ToliMidone 托利咪酮 41964-07-2
Toluene 甲苯 108-88-3
ToluenesulfonaMide-forMaldehyderesin 鄰/對(duì)甲苯磺酰胺甲醛樹脂 1338-51-8
TOMATIDINE HYDROCHLORIDE 番茄堿 6192-62-7
Torachrysone TORACHRYSONE 22649-04-3
TorMentic acid 2Α,19Α-二羥基熊果酸 13850-16-3
Tosyl chloride 4-甲苯磺酰氯 98-59-9
TPEN N,N,N',N'-四(2-吡啶甲基)乙二胺 16858-02-9
TRAMADOL HYDROCHLORIDE 73806-49-2
TraMiprosate 3-氨基丙烷磺酸 3687-18-1
Trandolaprilat 群多普利 87679-71-8
Tranilast * 53902-12-8
TRANS-(+/-)-11-CHLORO-2,3,3A,12B-TETRAHYDRO-2-METHYL-1H-DIBENZ[2,3:6,7]OXEPINO[4,5-C]PYRROL-1-ONE 反式-(+/-)-11-氯-2,3,3A,12B-四氫-2-甲基-1H-二苯并[2,3:6,7]氧雜卓并[4,5-C]吡咯-1-酮 129385-59-7
Trans-(1R,2R)-N,N'-bisMehtyl-1,2-cyclohexanediaMine 反-(1R,2R)-N,N\'-二甲基1,2-環(huán)己烷二胺 67579-81-1
trans-1,2-Difluoroethylene 1630-78-0
TRANS-1,3-PENTADIENE 反-1,3-戊二烯 2004-70-8
TRANS-1,4-CYCLOHEXENEDIOL 反式-1,4-環(huán)己二醇 41513-32-0
TRANS-1,4-DIBROMO-2-BUTENE 1,4-二溴-2-丁烯 821-06-7
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來(lái),移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時(shí)后.再放入-80度冰箱過(guò)夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時(shí)間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時(shí)。不能超過(guò)1小時(shí)。zui后放入-80度冰箱過(guò)夜。第二天放入液氮中。
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