細胞低溫凍存是培養(yǎng)室常規(guī)工作和通用技術。細胞凍存在-196℃液氮中，儲存時間幾乎是無限的。細胞凍存及復蘇的原則是慢凍快融。
1． 凍存細胞
（1）選對數增生期細胞(證明無支原體污染)，在凍存前1d換液。
（2）按常規(guī)方法把培養(yǎng)細胞制備成懸液，計數，使細胞密度達5×10 7 ／ml左右密度，離心，去上清。
（3）加入配制好的凍存液（培養(yǎng)液6.8ml，小牛血清2ml，DMSO 1ml，5.6%NaHCO3 0.1ml），按與去上清相同的量一滴一滴加入離心管中，然后用吸管輕輕吹打令細胞重懸。凍存細胞時培養(yǎng)液中加入保護劑10％二甲基亞砜(DMSO) 或甘油，可使冰點降低，使細胞內水分在凍結前透出細胞外。
（4）分裝于無菌凍存管中，每管加1.5m懸液。
（5）旋好凍存管并仔細檢查，一定要蓋緊，做好標記。
（6）凍存：在特殊的 儀器 或簡易的液氮容器中，按-1℃／min的速度，在30～40min時間內，下降到液氮表面，再停30min后，直接投入液氮中。要適當掌握下降冷凍速度，過快能影響細胞內水分透出，太慢則促進冰晶形成。
操作時應戴防護眼鏡和手套，以免液氮凍傷。 細胞低溫凍存是培養(yǎng)室常規(guī)工作和通用技術。細胞凍存在-196℃液氮中，儲存時間幾乎是無限的。細胞凍存及復蘇的原則是慢凍快融。
1． 凍存細胞
（1）選對數增生期細胞(證明無支原體污染)，在凍存前1d換液。
（2）按常規(guī)方法把培養(yǎng)細胞制備成懸液，計數，使細胞密度達5×10 7 ／ml左右密度，離心，去上清。
（3）加入配制好的凍存液（培養(yǎng)液6.8ml，小牛血清2ml，DMSO 1ml，5.6%NaHCO3 0.1ml），按與去上清相同的量一滴一滴加入離心管中，然后用吸管輕輕吹打令細胞重懸。凍存細胞時培養(yǎng)液中加入保護劑10％二甲基亞砜(DMSO) 或甘油，可使冰點降低，使細胞內水分在凍結前透出細胞外。
（4）分裝于無菌凍存管中，每管加1.5m懸液。
（5）旋好凍存管并仔細檢查，一定要蓋緊，做好標記。
（6）凍存：在特殊的 儀器 或簡易的液氮容器中，按-1℃／min的速度，在30～40min時間內，下降到液氮表面，再停30min后，直接投入液氮中。要適當掌握下降冷凍速度，過快能影響細胞內水分透出，太慢則促進冰晶形成。
操作時應戴防護眼鏡和手套，以免液氮凍傷。
