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血小板衍生的生長(zhǎng)因子的檢測(cè)方法

閱讀：509發(fā)布時(shí)間：2015-4-20

血小板衍生生長(zhǎng)因子是貯存于血小板α顆粒中的一種堿性蛋白質(zhì)。是低分子量促細(xì)胞分裂素。

1．AG1523細(xì)胞生長(zhǎng)在含10％小牛血清的MEM培養(yǎng)液中。檢測(cè)前用0.25％*消化生長(zhǎng)到匯合的細(xì)胞。每個(gè)35mm培養(yǎng)皿加入2ml含3×104細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)液，在37℃ 5％ CO2飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4天。洗去培養(yǎng)液，加2ml無(wú)血清的MCDB105培養(yǎng)液。繼續(xù)培養(yǎng)2天。

2．第6天時(shí)每個(gè)培養(yǎng)皿中約含有105細(xì)胞，洗去培養(yǎng)液。加入系列稀釋的待測(cè)樣品、0.1mg/ml人血清白蛋白、0.02μCi [3H]脫氧胸苷和無(wú)血清的MCDB105培養(yǎng)液，總量1ml。繼續(xù)培養(yǎng)48小時(shí)。

3．吸去培養(yǎng)液，用3～4ml 5％三氯醋酸溶液固定細(xì)胞10分鐘。吸去三氯醋酸溶液，用自來(lái)水輕輕洗去固定液，室溫中自然干燥。

4．每個(gè)培養(yǎng)皿加入0.5ml含1％ SDS的0.3mol/L NaOH溶液，室溫中溶液細(xì)胞15分鐘。將溶解物轉(zhuǎn)移到液體閃爍計(jì)數(shù)管中，加5ml閃爍液，在液體閃爍計(jì)數(shù)儀上計(jì)數(shù)放射性活性。約3ng/mlPDGF即能誘導(dǎo)50％zui大[3H]脫氧胸苷攝入。


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