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細(xì)胞的凍存步驟

閱讀：527發(fā)布時(shí)間：2015-7-2

細(xì)胞低溫凍存是培養(yǎng)室常規(guī)工作和通用技術(shù)。下面我們就來(lái)介紹一下細(xì)胞凍存的步驟：1.選對(duì)數(shù)增生期細(xì)胞,在凍存前1d換液。 
2.按常規(guī)方法把培養(yǎng)細(xì)胞制備成懸液，計(jì)數(shù)，使細(xì)胞密度達(dá)5×10 7 ／ml左右密度，離心，去上清。 
3.加入配制好的凍存液，按與去上清相同的量一滴一滴加入離心管中，然后用吸管輕輕吹打令細(xì)胞重懸。凍存細(xì)胞時(shí)培養(yǎng)液中加入保護(hù)劑10％二甲基亞砜或甘油，可使冰點(diǎn)降低，使細(xì)胞內(nèi)水分在凍結(jié)前透出細(xì)胞外。 
4.分裝于無(wú)菌凍存管中，每管加1.5m懸液。 
5.旋好凍存管并仔細(xì)檢查，一定要蓋緊，做好標(biāo)記。 
6.凍存：在特殊的 儀器 或簡(jiǎn)易的液氮容器中，按-1℃／min的速度，在30～40min時(shí)間內(nèi)，下降到液氮表面，再停30min后，直接投入液氮中。要適當(dāng)掌握下降冷凍速度，過(guò)快能影響細(xì)胞內(nèi)水分透出，太慢則促進(jìn)冰晶形成。 



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