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技術文章

細胞分離液快速操作說明

閱讀:287發(fā)布時間:2017-10-19

細胞分離液快速操作說明和使用及保存中的注意事項:

注意:1,分離液和所分離樣本一定在20℃水浴箱中復溫20 分鐘保證分離液和所分離樣本溫度在20℃±2℃時分離效果。

2,使用無靜電反應的離心管,推薦使用未經過堿處理的玻璃離心管。

3,所有操作過程一定要在無菌條件下進行。

4,*抗凝劑選擇:EDTA、枸櫞酸、肝素。應注意在血液稀釋過程中應去除抗凝劑

體積。

A. 小量分離-使用1-2ml新鮮抗凝血,骨髓,臍帶血:

1,取新鮮抗凝血1-2ml,與全血及組織勻漿稀釋液(Cat#:2010C1119)1:1 混勻;

2,小心加于與混合液等體積的細胞分離液之液面上;

3,以400g(約1500 轉/分)離心15 分鐘(半徑15cm 水平轉子);

    此時離心管中由上至下細胞分為四層。*層;為血漿層。第二層;為環(huán)狀乳白色淋巴細胞層。第三層;為透明分離液層。第四層;為紅細胞層。收集第二層細胞放入含4-5ml 細胞洗滌液(Cat#:2010X1118)的試管中,充分混勻后,以1800 轉/分離心20 分鐘,棄去上清留沉淀細胞重新懸起。重復洗滌2 次即得所需細胞。

B. 中量分離-使用5-10ml新鮮抗凝血,骨髓,臍帶血:

1,取新鮮抗凝血5-10ml,與全血及組織勻漿稀釋液(Cat#:2010C1119)1:1 混勻;

2,將混合液小心疊加于細胞分離液之液面上;(混合液:分離液=2:1)

3,以500g(約1800 轉/分)離心15 分鐘(半徑15cm 水平轉子);

    此時離心管中由上至下細胞分為四層。*層;為血漿層。第二層;為環(huán)狀乳白色淋巴細胞層。第三層;為透明分離液層。第四層;為紅細胞層。收集第二層細胞放入含10ml 細胞洗滌液(Cat#:2010X1118)的試管中,充分混勻后,以1800 轉/分離心20 分鐘,棄去上清留沉淀細胞重新懸起。重復洗滌2 次即得所需細胞。

C. 大量分離I-使用20ml新鮮抗凝血,骨髓,臍帶血

1, 取新鮮抗凝血20ml 以200g(約1100 轉/分)離心20 分鐘棄去血漿;

2,向棄去血漿的血細胞中加入全血及組織勻漿稀釋液(Cat#:2010C1119)12ml 小心混勻;

3,將混合液小心疊加于細胞分離液之液面上;(混合液:分離液=2:1)

4,以600g(約2000 轉/分)離心15 分鐘(半徑15cm 水平轉子);此時離心管中由上至下細胞分為四層。*層;為血漿層。第二層;為環(huán)狀乳白色淋巴細胞

層。第三層;為透明分離液層。第四層;為紅細胞層。收集第二層細胞放入含20ml 細胞洗滌液(Cat#:2010X1118)的試管中,充分混勻后,以1800 轉/分離心20 分鐘,棄去上清留沉淀細胞重新懸起。重復洗滌2次即得所需細胞。

D. 大量分離II-使用50ml新鮮抗凝血,骨髓,臍帶血:

1, 取新鮮抗凝血50ml 與HES-TBD550 液1:1 混合后再與1 份注射用生理鹽水混勻20±2℃靜置30 分鐘。吸取混濁的上清液備用,棄去底部紅細胞。

2,將步驟1 中留取的上清液以200g(約1100 轉/分)離心20 分鐘棄去上清保留沉淀細胞;

3,向沉淀的細胞中加入全血及組織勻漿稀釋液(Cat#:2010C1119)20ml 小心混勻;

4,將混合液小心疊加于細胞分離液之液面上;(混合液:分離液=2:1)

5,以600g(約2000 轉/分)離心15 分鐘(半徑15cm 水平轉子);

    此時離心管中由上至下細胞分為四層。*層;為血漿層。第二層;為環(huán)狀乳白色淋巴細胞層。第三層;為透明分離液層。第四層;為紅細胞層。收集第二層細胞放入含20ml 細胞洗滌液(Cat#:2010X1118)的試管中,充分混勻后,以1800 轉/分離心20 分鐘,棄去上清留沉淀細胞重新懸起。重復洗滌2 次即得所需細胞。


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