反轉(zhuǎn)錄試劑盒采用經(jīng)優(yōu)化的穩(wěn)定的反轉(zhuǎn)錄預(yù)混體系5×RTMasterMix進(jìn)行RNA的反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，該預(yù)混體系包含點突變致RNaseH活性缺失的反轉(zhuǎn)錄酶M-MLVⅢ、dNTP、反應(yīng)Buffer和RNaseInhibitor。該試劑盒采用的反轉(zhuǎn)錄酶為經(jīng)進(jìn)一步改良的M-MLVⅢ，可以極大限度地抑制RNA結(jié)構(gòu)與反轉(zhuǎn)錄酶的非特異性結(jié)合，不僅保證了的cDNA合成效率和cDNA合成速度，同時也使得合成的cDNA本底低、純度高、完整性好。使用時只需加入模板、引物和RNaseFreeH2O即可，大大簡化了操作過程,提高了效率,減少了操作過程中的人為誤差,具有快速簡便、重復(fù)性高、特異性好、靈敏度高和穩(wěn)定性好的特點。本試劑盒提供了進(jìn)行RT-PCR所需要的全部試劑。使用本試劑盒擴(kuò)增得到的目的產(chǎn)物3'端具有A尾，可以直接克隆于T載體中。

儲存：

請放置于-20°C，可保存兩年，請避免反復(fù)凍融

操作方法

1.按以下組分配制反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液

TotalRNAorPoly（A）RNA0.2-2μg

5×RTMasterMix4μl

*Oligo（dT）20Primer1μl

RNaseFreeH2OUpto20μl

*注：反轉(zhuǎn)錄引物可根據(jù)需要改用隨機(jī)引物或

特異性引物。

2.在PCR儀上按以下條件進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng):

30°C5min

42°C30~60min

85°C5min

4°C

3.配置反應(yīng)體系如下進(jìn)行PCR擴(kuò)增：

2×TaqPCRMix25μl

反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物1-5μl

上游引物（10μM）2μl

下游引物（10μM）2μl

滅菌雙蒸水Upto50μl

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