【中文名稱】：雞甲狀腺素(T4)ELISA 試劑盒

【英文名稱】： Chicken Thyroxine,T4 ELISA Kit

【產(chǎn)品規(guī)格】:96T/48T

【保存條件】：2-8℃低溫保存

【保質(zhì)期】：6個(gè)月，所有試劑盒均提供批次。

【試劑盒成分】：酶標(biāo)板，試劑，標(biāo)準(zhǔn)品等。

檢測(cè)范圍：人、綿羊、小鼠、大鼠、豬、兔、山羊、牛、馬、豬、其它動(dòng)物細(xì)胞因子、植物細(xì)胞因子、骨代謝、細(xì)胞凋亡、激素內(nèi)分泌、活性多肽、肝纖維化、自身抗體、血栓與止血、腫瘤、自身抗體科研Elisa檢測(cè)試劑盒。  

用于科研方面，不用于臨床診斷

 ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測(cè)定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡(jiǎn)稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來(lái)的一種免疫酶技術(shù)。此項(xiàng)技術(shù)自70年代初問(wèn)世以來(lái)，發(fā)展十分迅速，目前已被廣泛用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)科學(xué)的許多領(lǐng)域。 

原理

ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的高效催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，每加入一種試劑孵育后，可通過(guò)洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。在實(shí)際應(yīng)用中，通過(guò)不同的設(shè)計(jì)，具體的方法步驟可有多種。即:用于檢測(cè)抗體的間接法(圖a)、用于檢測(cè)抗原的雙抗體夾心法(圖b)以及用于檢測(cè)小分子抗原或半抗原的抗原競(jìng)爭(zhēng)法等等。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法。

雞甲狀腺素(T4)ELISA 試劑盒

Elisa試劑盒酶免實(shí)驗(yàn)為保證測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性，請(qǐng)按照下列良好實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范（GLP）進(jìn)行實(shí)驗(yàn)

1.要經(jīng)常檢查酶標(biāo)儀和微量轉(zhuǎn)移器的精度和準(zhǔn)確度；

2.使用前，試劑儲(chǔ)存在2-8℃。

3.在進(jìn)行分析操作之前，請(qǐng)將所有的試劑回溫到室溫（20-25℃）；

4。所有的 試劑在使用前，通過(guò)輕輕地翻轉(zhuǎn)搖動(dòng)進(jìn)行充分的混合，但不要引起泡沫；

5.實(shí)驗(yàn)開(kāi)始，所有的操作步驟應(yīng)該在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)完成，不要中斷或超時(shí)；

6.實(shí)驗(yàn)過(guò)程中注意保證溫度（20-25℃）；

7.不要將不同批次的試劑混用，不要使用過(guò)期的試劑；

8.每個(gè)樣品只能用自己的吸頭，不能混用，防止交叉感染；

9.所有的樣品和標(biāo)志物必須同時(shí)使用，所有的實(shí)驗(yàn)條件保持*；

10.按照實(shí)驗(yàn)所需的量取用試劑，未用完的試劑不要倒回原瓶中；

11.所有的試劑瓶操作完成后立即蓋好蓋，不要將不同試劑瓶的蓋混蓋。

規(guī)格48Test/96Test 

Elisa試劑盒   保存溫度：2-8C

實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

1. 嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
2. 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過(guò)程中不要讓微孔干燥掉。
3. 消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。
4. 底物顯色液應(yīng)呈無(wú)色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍(lán)的底物也不能使用。
5. 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果。
6. 在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
7. 平衡至室溫后再打開(kāi)密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
8. 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白容劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成份都會(huì)破壞試劑盒中反應(yīng)試劑 的生物活性。
9. 不能使用過(guò)期產(chǎn)品。
10. 如果可能傳播疾病，所有的樣品都應(yīng)保管好，按照規(guī)定的程序處理樣品或檢測(cè)裝置。

試劑準(zhǔn)備

試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。

1. 標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶：試劑盒提供6管標(biāo)準(zhǔn)品，沒(méi)管已標(biāo)定濃度，并且凍干。試驗(yàn)前在每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品管中加入0.5ml*，蓋好后靜置10分鐘以上，然后反復(fù)顛倒/搓動(dòng)助其溶解，使其恢復(fù)為每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品管身標(biāo)注的濃度。
2. 20X洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1:20稀釋，即1份20X洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

注意事項(xiàng)：

1. 標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測(cè)。如有細(xì)菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性反應(yīng)。保存過(guò)久可發(fā)生聚合在ELISA中可使本底部加深。
2. 凍結(jié)標(biāo)本溶解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混均宜輕緩，避免氣泡，可上下顛倒混合，不要再混均器上強(qiáng)烈震蕩。
3. 渾濁或有沉淀的標(biāo)本應(yīng)先離心或過(guò)濾，澄清后再檢測(cè)。
4. 反復(fù)凍融會(huì)使蛋白效率降低，所以代測(cè)樣本如需保存做多次檢測(cè)，宜少量分裝冰存。

ELISA實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線平直一般有以下原因：標(biāo)準(zhǔn)曲線制備是否不當(dāng)，洗孔不凈，洗孔不充分讀數(shù)不準(zhǔn)確或吸量有誤。查找原因，即可找到相應(yīng)的解決方案。

操作步驟

1. 從室溫平衡20分鐘后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔哥加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50ul。
3. 樣本孔中加入待測(cè)樣本50ul；空白孔不加.
4. 除空白孔外標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100ul，用封板膜封住反應(yīng)孔，37C水浴鍋或恒溫箱溫育60min.
5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350ul）,靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此反復(fù)4-5次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6. 每孔加入底物A、B各50ul，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定個(gè)孔的OD值。