一、單克隆抗體的產(chǎn)生 
    經(jīng)過反復克隆化獲得的抗體陽性雜交瘤細胞株應立即擴大培養(yǎng)(除及時凍存的細胞外)。因多次傳代易引起染色體逐漸丟失而使細胞產(chǎn)生抗體能力逐漸減弱甚至消失，還應盡早使用獲得的抗體陽性雜交瘤細胞株制備單克隆抗體。 
    大量制備單克隆抗體的方法有兩類：一類是動物體內(nèi)誘生法，另一類是體外培養(yǎng)法。 
    (一).動物體內(nèi)誘生法
　　接種動物常選用BALB/c小鼠或與BALB/c小鼠雜交的Fl代小鼠。接種前l(fā)周左右，于小鼠腹腔內(nèi)注入降植烷或醫(yī)用液狀石蠟0.5ml。每次小鼠腹腔注射0.5×10⁶～1×10⁶個雜交瘤細胞。接種后7～10天，小鼠腹部逐漸長大，誘生出腹腔腫瘤并產(chǎn)生含單克隆抗體的腹腔積液。接種后10～14天，可分次采集腹腔積液，1只可得10～20ml(5～20mg/m1)。收集到的腹腔積液，離心去除細胞，滅活(56℃、30min)，再次離心，取上清液，加入0.1%疊氮鈉，分裝保存于-20℃。如凍干保存，抗體效價可保持更久。 
    (二).體外培養(yǎng)法 
    將雜交瘤細胞接種到培養(yǎng)瓶中，在5%C02，37℃孵箱中培養(yǎng)數(shù)天后，收集上清液，離心去除細胞和碎片。本法所得抗體含量不高，為5～25pg/ml。但仍可滿足部分實驗的要求。另一種是雜交瘤細胞高密度培養(yǎng)，分兩種類型：一類是懸浮培養(yǎng)系統(tǒng)，即采用轉(zhuǎn)瓶或發(fā)酵罐式的生物反應器；另一類是細胞固定化培養(yǎng)系統(tǒng)，包括中空纖維細胞培養(yǎng)系統(tǒng)和微囊化細胞培養(yǎng)系統(tǒng)。高密度培養(yǎng)可使單位體積單克隆抗體含量明顯增加，產(chǎn)量可達lg/L。 
    二、單克隆抗體的純化 
    從培養(yǎng)液或腹腔積液獲得的單克隆抗體，不需要純化即可應用于日常診斷或定性研究。由于其中含有大量來自培養(yǎng)基、宿主或克隆細胞本身的一些無關蛋白，如果用于免疫標記測定，如放射性核素、酶、熒光素或*標記等，必須進一步分離和純化。無論培養(yǎng)液、腹腔積液或血清，均可先用半飽和、飽和硫酸銨進行沉淀，達到初步濃縮和純化的目的。經(jīng)過適當溶解和充分稀釋后，可用親和層析法進一步純化。 
    三、單克隆抗體的性質(zhì)鑒定 
    當獲得多個雜交瘤細胞株時，要了解哪一株是zui適用的，則一定要通過各種鑒定。常見的方法有：
    (一)Ig類型測定 
    通常以免抗小鼠Ig類及亞類抗體與培養(yǎng)液中單克隆抗體按雙向瓊脂擴散法進行測定，確定其Ig類型或Ig亞類型別。 
    (二)特異性測定 
    把與相應抗原有關的物質(zhì)同McAb進行多種免疫學檢測，鑒定McAb的特異性。這直接關系到McAb應用的可靠性。 
    (三)抗體效價測定 
    效價以腹腔積液或培養(yǎng)液的稀釋度表示，稀釋度越高，則抗體效價也越高。在凝集反應中，腹腔積液效價可達5萬以上；在ELISA中，腹腔積液效價可達100萬以上。如ELISA效價低于10萬，用于診斷測定將不會達到很高的敏感度，應重新制備。 
    (四)表位測定 
    通過雙向瓊脂擴散法，把兩種McAb混合，加入于同一孔中，對孔放相應的抗原，如出現(xiàn)兩條沉淀線可證明兩者為抗不同表位的McAb；利用ELISA雙抗夾心法，將一種McAb作包被抗體，另一作酶標記，其中加入抗原，如顯色，則證明兩者抗不同的表位。 
    (五)親和力測定 
    只有當抗原與抗體結(jié)合部位結(jié)構(gòu)*吻合時，抗體的親和力zui大。這種結(jié)合力以抗原抗體反應平衡時，抗原與抗體濃度的乘積與抗原抗體復合物濃度之比表示。如親和力太低，會嚴重影響測定的敏感性。 
    (六)染色體分析 
    正常鼠的脾細胞染色體數(shù)：40，全部為端著絲粒；小鼠骨髓瘤細胞染色體：SP2/0細胞為62～68，NS-1為54～64。大多數(shù)為非整倍性，有中部和亞中部著絲點。雜交瘤細胞的染色體數(shù)目接近兩親本細胞染色體數(shù)目的總和，在結(jié)構(gòu)上多數(shù)為端著絲粒染色體外．還應出現(xiàn)少數(shù)標志染色體。染色體數(shù)目多且較集中的雜交瘤細胞分泌價的抗體。