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細胞融合的具體步驟包括:人肺泡上皮細胞,HPAEpiC細胞
(1)細胞準備,分貼壁和懸浮細胞兩種。前者可直接將兩親本細胞混合培養(yǎng),后者需制成一定濃度的細胞懸浮液。
(2)細胞融合,加促融因子于將行融合的細胞之中,誘導融合。
(3)雜種細胞選擇。利用選擇性培養(yǎng)基等,使親本細胞死亡,而讓雜種細胞存活。
(4)雜種細胞克隆。對選出的雜種細胞進行克隆(選擇與純化),經(jīng)過培養(yǎng),就能獲得所需要的無
人肺泡上皮細胞,HPAEpiC細胞動物細胞融合圖
人肺泡上皮細胞,HPAEpiC細胞
植物細胞融合較動物細胞難些。首先,植物細胞外面有細胞壁,因此需要先用纖維素酶去壁,形成原生質(zhì)體后,才能進行細胞融合。其次,植物細胞融合后形成的雜種細胞,經(jīng)過培養(yǎng)有可能分化發(fā)育成植株,而動物細胞的雜種細胞則缺乏此種能力。植物體細胞融合的過程大致包括:細胞分離,原生質(zhì)體制備,原生質(zhì)體融合,雜種細胞篩選及其培養(yǎng),然后再通過愈傷組織誘導分化出根、莖、葉,zui后長成完整的體細胞雜種植株。植物細胞融合技術(shù)不僅打破了常規(guī)有性雜交育種的親和性障礙,而且為實現(xiàn)“超遠緣雜交”提供了可能,有重大的應用價值。
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