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人結(jié)腸癌細胞,HRT-S1細胞

時間:2014/8/1閱讀:797
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人結(jié)腸癌細胞,HRT-S1細胞凍存和復蘇的方法

細胞凍存前,仔細檢查細胞凍存所需的儀器和試劑是否齊全:一般主要有:傳代細胞單層、適宜生長液、滅活小牛血清、慶大霉素溶液、7.5NaHC03溶液、0.25%胰蛋白酶溶液、標簽用具:100ml方瓶(培養(yǎng)細胞用)、克氏瓶、紅翻帽塞、吸管(10mllml)、細胞凍存管、二甲基亞砜、CO2孵箱、超掙臺、倒置顯微鏡、28冰箱、-20冰箱、液氮罐

細胞凍存開:人結(jié)腸癌細胞,HRT-S1細胞

1.細胞:選對數(shù)生長期細胞,收集細胞24小時前換液一次。

2.計數(shù):按常規(guī)方法把細胞制成細胞懸液,計數(shù),令細胞密度達5×106/ml,離心去上清,吸入離心管中。

3.凍存液:先用培養(yǎng)液9分+DMSO 1分(或甘油)配成10%的DMSO凍存液,按上法一滴滴加入離心管中,然后用吸管輕輕吹打令細胞重懸。

4.分裝:分裝入無菌安剖中,每安剖加1.5毫升細胞懸液。

5.封口:用塑料安剖時擰緊瓶口即可;如用火焰封閉安剖口后,仔細檢查,定要封嚴,必要時可浸入藍色液中觀察,為安全起見,把安剖縫入紗布小袋中,以防液氮浸入后,融解時因受熱發(fā)生爆炸傷人;紗袋一端系以線繩,末端扎有小牌,注明:細胞名稱,凍存日期,以便日后查找。

復蘇方法

1.從液氮罐中取出安剖;有時因安剖未封嚴,浸入了液氮,取出后因安剖內(nèi)液氮迅速氣化而發(fā)生爆炸,因此應(yīng)帶有防護眼睛和手套。

2.迅速放入盛有36℃~37℃水的搪瓷罐中,扣上蓋并不時搖動,盡快解凍。

3.剪開紗布口袋,取出安剖,用70%酒精擦拭消毒后,凈化臺上打開蓋,用吸管吸出細胞懸液,裝入離心管中,再補加10ml培養(yǎng)液,吹打使細胞懸浮。

4.低速離心(5001000轉(zhuǎn)/分)5分鐘,取上清后再重復用培養(yǎng)液漂洗、離心。

5.加入培養(yǎng)液適當稀釋后,再移裝入培養(yǎng)瓶中,置溫箱培養(yǎng),次日更換一次培養(yǎng)液后再繼續(xù)培養(yǎng)。

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