人 C-反應蛋白(CRP)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說明書

本試劑僅供研究使用 目的：本試劑盒用于測定人血清，血漿及相關液體樣本中 C-反應蛋白(CRP)的含量。

實驗原理：

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人 C-反應蛋白(CRP)水平。用純化的人 C-反應蛋白(CRP)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中加入 C-反應蛋白(CRP)，再與 HRP 標記的 C-反應蛋白(CRP)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的 C-反應蛋白(CRP)呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中人 C-反應蛋白(CRP)的濃度。

操作步驟：

• 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔 10 孔，在*、第二孔中分別加標準品 100μl，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液 50μl，混勻；然后從*孔、第二孔中各取 100μl 分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液 50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 棄掉，再各取 50μl 分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液 50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取 50μl 分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液 50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取 50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液 50μl，混勻后從第九第十孔中各取 50μl 棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為 50μl，濃度分別為 1800μg/L，1200μg/L ，600μg/L，300μg/L，150 μg/L）。

• 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl（樣品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

• 加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外。

• 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

• 配液：將 30（48T 的 20 倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30（48T 的 20 倍）倍稀釋后備用。

• 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此重復 5 次，拍干。

• 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色 10 分鐘.

• 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

• 測定：以空白孔調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進行。

  試劑盒性能：

  1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù) R 值為 0.92 以上。

  2.批內(nèi)與批間應分別小于 9%和 15%