細(xì)胞核移植，就是將一個細(xì)胞核用顯微注射的方法放進(jìn)另一個細(xì)胞里去。前者為供體，可以是胚胎的干細(xì)胞核，也可以是體細(xì)胞的核。受體大多是動物的卵子。因卵子的體積較大，操作容易，而且通過發(fā)育，可以把特征表現(xiàn)出來，因此細(xì)胞核移植技術(shù)，主要是用來研究胚胎發(fā)育過程中，細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)的功能，以及二者間的相互關(guān)系；探討有關(guān)遺傳，發(fā)育和細(xì)胞分化等方面的一些基本理論問題。該技術(shù)已有幾十年的歷史。1952年，Briggs 和King在兩棲類動物中獲得核移植成功，使得發(fā)育生物學(xué)上的幾個根本問題得到了解答。Gurdon用非洲爪蟾的上皮細(xì)胞等體細(xì)胞的核作移植，確立了已經(jīng)分化的細(xì)胞核可以正常發(fā)育的事實。我國胚胎學(xué)家童第周等在魚類細(xì)胞核移植方面做了許多工作。他們在1976年前后獲得的鯉鯽移核魚，不僅有理論意義，而且也為魚類育種開辟了一條新的途徑。
哺乳動物的細(xì)胞核移植也早已引起關(guān)注，因哺乳類受精卵極小，體外培養(yǎng)和細(xì)胞核移植技術(shù)難度大，因此直到1981年IIImensee和Hoppe才報道獲得成功。Mcgrath和Solter 在1983年發(fā)表了用核移植技術(shù)與細(xì)胞融合相配合的方法，能將90%以上的移核卵培養(yǎng)到胚泡期。經(jīng)過胚胎移植，均可獲得一定比例的核移植小鼠。
本實驗以蛙和哺乳動物為實驗材料介紹細(xì)胞核移植技術(shù)。
實驗技術(shù)
一、蛙的細(xì)胞核移植
（一）受體卵的準(zhǔn)備
1.去膜：
經(jīng)人工催產(chǎn)使蛙卵成熟。擠出成熟的蛙卵，逐個去掉卵膠膜，接著把卵整齊地排列在高溫滅菌過的培養(yǎng)皿內(nèi)，使其粘于皿底。并使卵子動物極朝上，以便進(jìn)行激動和挑核。然后加入適量的手術(shù)液，每次可在一個培養(yǎng)皿內(nèi)排列卵25-40個。
2. 激動：
蛙卵在未受精前仍處于第二次成熟分裂的中期。為了使卵子完成第二次成熟分裂，排出第二極體，在雙目解剖鏡下，用一枚消毒過的玻璃針在動物極靠近赤道的地區(qū)淺刺一下，目的是代替自然受精時精子入卵的過程。由于針刺動作比精子入卵的速度快得多，所以針刺手術(shù)要輕緩。激動后的卵子，10-15分鐘后產(chǎn)生第二極體。在解剖鏡下可見動物極附近有一折光的圓形小球，此即第二極體。
3. 挑核：
當(dāng)?shù)诙O體出現(xiàn)時，用一枚消毒過的玻璃針在極體處斜插入卵子表層，然后迅速提起針尖，由于卵黃膜的破裂，極體下的卵核隨著一小部分細(xì)胞質(zhì)流出卵外，形成一個卵外球，一般極體排出15分鐘以后會逐漸消失。這樣挑核應(yīng)在極體出先后10分鐘內(nèi)完成，否則核將沉入卵子中心，去核手術(shù)不易成功。
4. 再去膜：
挑核后經(jīng)過10分鐘左右，待傷口基本愈合時，用兩把磨的很尖的鐘表鑷子，漸次剝?nèi)ヂ淹饽z膜，直至余下一層受精膜為止。操作步驟如下：在雙目解剖鏡下，先將一把尖頭鑷子的一邊從卵子附著皿底的膠膜處小心而快速地插入到zui內(nèi)層膠膜，然后夾緊膠膜，把卵固定住，再用另一把鑷子從卵子另一側(cè)夾緊膠膜，向上向后把膠膜掀去，若用兩把鑷子左右對拉，則易損傷卵子，且使卵質(zhì)變位，影響胚胎發(fā)育。
剝膜后的卵子移到盛有手術(shù)液的培養(yǎng)皿中置于玻璃板上，供注核用。
（二）供體細(xì)胞的分離
取囊胚或早期原腸胚的外胚層作為供體細(xì)胞。先在濾紙上除去膠膜，然后移入皿底涂有一層瓊脂的并盛有分離液的培養(yǎng)皿中，用兩把鑷子剝?nèi)ヅ咛ネ庥嘞碌母鲗幽z膜，切下外胚層，吸去不用的胚胎部分。一個很小的組織塊放在分離液內(nèi)數(shù)分鐘，并輕輕搖動，細(xì)胞便可自行分散。如不分散，可用毛細(xì)吸管輕輕吹打。
分散后的胚胎細(xì)胞用毛細(xì)吸管移到盛有手術(shù)液的培養(yǎng)皿中，置于涂有瓊脂的小載玻片上，作為移植時的供體細(xì)胞。

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