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試劑盒名稱：大鼠VB12elisa試劑盒
規(guī) 格：96T
保存條件：2-8℃
自備材料：
1． 蒸餾水。
2． 加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3． 振蕩器及磁力攪拌器等。
4. 標準規(guī)格酶標儀。
5. 7℃恒溫箱。
實驗步驟：
1.分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準品孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品孔中加入標準品50μl；在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。人雌激素（E）每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。輕輕晃動混勻，37℃溫育60分鐘。
2.棄去液體，甩干，每孔加滿稀釋后洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。如此重復5次，拍干。
3.人雌激素（E）每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。
4.取出酶標板，每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
5.人雌激素（E）測定：以空白孔調(diào)零，在450nm波長下測量各孔的吸光度值（OD值）。?測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
6.根據(jù)標準品的濃度及對應(yīng)的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程，人雌激素（E）再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了的，其實際濃度應(yīng)該乘以總稀釋倍數(shù)。
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