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免疫組化結(jié)果判斷的基本原則
點擊次數(shù)：914 發(fā)布時間：2017-11-17
免疫組織化學（簡稱免疫組化）是組織化學的一種，它是利用已知的特異性抗體或抗原能特異性結(jié)合的特點，通過化學反應(yīng)使標記于結(jié)合后的特異性抗體上的顯示劑，如酶、金屬離子、同位素等，顯示一定的顏色，并借助顯微鏡觀察其顏色的變化，從而在抗原抗體結(jié)合部位確定組織、細胞結(jié)構(gòu)的化學成份或化學性質(zhì)。免疫組化標記具有形態(tài)學特點，若能熟練掌握則有助于對免疫組化標記結(jié)果的正確判斷，現(xiàn)擇要分述如下：
一
陽性標記色度特征
免疫組化標記時細胞陽性著色程度取決于抗原含量、分布密度和標記方法及其敏感性。一般而言，抗原含量越多，分布密度越高，標記方法越敏感，陽性結(jié)果顯色則越強。根據(jù)陽性標記的顯色程度分為：淡黃色，提示為弱陽性；棕黃色，為中等度陽性；棕黑色，示為強陽性。在結(jié)果判斷中，后兩者較有意義，可作為判斷依據(jù)。而前者除考慮標本處理和方法學因素外，可能與細胞只有輕度異常表達，或某些細胞攝取了周圍組織抗原之故。
二
陽性標記細胞學特征
免疫組化標記中，陽性標記細胞學特征是反映抗原在細胞中的定位和分布情況。在診斷中陽性細胞以擬標記的細胞為前提，陽性表達必須在細胞特定的抗原部位，若不在抗原所在部位的陽性表達和非目標細胞即使陽性也不應(yīng)作為判斷依據(jù)。根據(jù)抗原在細胞中分布和陽性顆粒沉淀部位可分為以下5種類型：
1.胞膜型 陽性顆粒主要分布于細胞膜表面，形成一薄層棕黃色顆粒包繞整個細胞。此類型常見于某些膜抗原，如上皮膜抗原（EMA）、白細胞共同抗原（LCA）及B細胞、T細胞、粒細胞相關(guān)抗原（GAA）和Ki-1等。
2.胞核型 陽性顆粒定位于細胞核，呈均勻分布或位于核膜下，有的呈小斑塊狀不規(guī)則分布。此多見于增殖細胞核抗原、Ki-67及激素受體中雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）和基因p53等。
3.胞漿型 陽性顆粒主要分布于細胞漿。大部分抗原均屬于此種類型，如細胞角蛋白、波形蛋白、結(jié)蛋白、神經(jīng)絲蛋白、肌紅蛋白、α1-抗胰*及前列腺特異性抗原（PSA）等。依據(jù)抗原在胞漿內(nèi)分布形式，通常表現(xiàn)為彌漫性分布或局限性分布。前者陽性顆粒彌漫而均勻地分布于整個細胞漿。局限性是指陽性顆粒呈小斑點狀或斑塊狀局限于細胞漿中的某一部位、核周或細胞漿的一側(cè)。
4.微絨毛型 抗原顆粒主要分布于腺癌細胞的微絨毛，而胞漿和胞膜可以是陽性或陰性表達。這種表現(xiàn)形式zui常見于各種腺癌，如甲狀腺癌、乳腺癌、胃腸腺癌、膽道腺癌、等。其特點是陽性顆粒除靠近腔面陽性外，其余基底部可呈陰性反應(yīng)。
5.復(fù)合型 在常規(guī)免疫組化標記中，同一種抗原可以同時表達于胞膜和胞漿、胞核和胞漿，但很少發(fā)現(xiàn)胞膜和胞核同時表達。值得注意的是組織標本固定不及時造成抗原移位使胞核和胞漿同時陽性。
三
非特異著色特征
以下情況可干擾免疫組化標記結(jié)果的觀察和判斷：
(1）抗體交叉反應(yīng)： 是由于該抗原決定簇同時存在于多種組織細胞，如GFAP可同時存在于星形膠質(zhì)細胞和唾液腺肌上皮。S-100蛋白則更為嚴重，可表達于多種組織細胞。因此，應(yīng)全面了解和認識該抗體的功能和標記范圍。故抗體交叉反應(yīng)只要應(yīng)用得當仍有助于診斷。
（2）非特異性染色 是指抗原無明確定位，腫瘤細胞與間質(zhì)細胞、細胞與間質(zhì)均為黃色，相互累及一片，色度無深淺之分。這種標記組織片不能作為免疫組織標記結(jié)果判斷依據(jù)。
非特異性染色的原因常為組織標本固定不佳、抗體質(zhì)量問題或稀釋度不合理及操作方法不規(guī)范等。因此，免疫組化特異性染色定位非常重要，如前所述，陽性顆粒應(yīng)位于細胞胞膜、胞漿或胞核，陽性細胞與陰性細胞相互交雜，陽性染色強度深淺不一。如果缺乏細胞間的不均一性染色，即是呈陽性染色，常提示為非特異性染色。
免疫組化結(jié)果的判斷原則及對假陰性和假陽性的認識
一
免疫組化結(jié)果的判斷原則
免疫組化具有特異性強、敏感性高及定位正確等優(yōu)點，但隨著免疫組化應(yīng)用的普及和深入，越來越多的問題也隨之出現(xiàn)。因此，掌握對免疫組化結(jié)果的判斷原則是很重要的。
必須設(shè)染色對照 每批染色都要以特異性的陽性對照和陰性對照為基礎(chǔ)，才能對染色結(jié)果做出正確的判斷。沒有陽性對照，就不能做出真正陰性結(jié)果的判斷；同理，沒有陰性對照，也就不能做出真正陽性結(jié)果的判斷。因而，沒有對照的免疫組化染色，即使做出了判斷也是不可信的。
抗原表達必須在特定部位 陽性表達必須在細胞和組織特定的抗原部位才能視為陽性，如LCA在細胞膜上、Keratin在細胞漿內(nèi)、S-100蛋白在胞漿和胞核內(nèi)，EMA在細胞膜上。不在抗原所在部位的陽性表達一概不能視為陽性。
陰性結(jié)果不能視為抗原不表達 即陰性結(jié)果不能認為具有否定意義；陽性表達有強弱、多少之分，哪怕是只是有少數(shù)細胞陽性（但要在抗原所在部位）也要視為陽性表達，不能認為個別細胞陽性而不作陽性看待。
免疫組化與HE切片診斷應(yīng)以HE切片診斷為準 當免疫組化診斷結(jié)果與HE切片診斷不一致時，應(yīng)再結(jié)合臨床資料、X線等影像學及實驗室結(jié)果綜合分析，不能用免疫組化檢查結(jié)果HE切片診斷。
二
引起假陰性和假陽性結(jié)果的原因
1.假陰性結(jié)果的原因主要是：
（1）抗體已失活或濃度不當或抗體本身達不到應(yīng)有的敏感度；
（2）由于組織自溶，抗原擴散而導致抗原消失，特別在*固定的標本中因抗原漏出而致假陰性，因此應(yīng)多用新鮮固定之標本；
（3）操作步驟不當，如反應(yīng)時間不夠或過久、洗脫不夠或溫度過高；
（4）組織或細胞中抗原的含量很低，所用的方法難以檢測到，如用直接法檢測為陰性，但改用間接法時則為陽性。
2.假陽性結(jié)果的主要原因是：
（1）所用的抗體與其它無關(guān)的抗原有交叉反應(yīng)，特異性差，特別在應(yīng)用多克隆抗血清時更易出現(xiàn)；
（2）所用抗體濃度過高或染色過程中切片干燥導致抗體與組織產(chǎn)生非特異性結(jié)合；
（3）組織或細胞中有內(nèi)源性過氧化物酶、堿性磷酸酶及*等產(chǎn)生非特異性顯色；