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3-羥-3-甲戊二酰輔酶AELISA試劑盒技術(shù)背景

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3-羥-3-甲戊二酰輔酶AELISA試劑盒技術(shù)背景:
甲戊二羥酸通路(mevalonate pathway),又稱為3-羥-3-甲戊二酰輔酶A(HMG-COA)還原酶通路或甲戊二羥酸依賴性通路,是所有高等真核生物和許多細(xì)菌具有的重要的細(xì)胞代謝通路,用于體內(nèi)產(chǎn)生二甲基丙烯焦磷酸(dimethylallyl pyrophosphate;DMAPP)和異戊二烯焦磷酸(isopentenyl pyrophosphate;IPP)作為生物大分子合成的基礎(chǔ),包括蛋白質(zhì)異戊二烯化、細(xì)胞膜維護(hù)、激素合成、蛋白固著、蛋白糖化等。3-羥-3-甲戊二酰輔酶A還原酶(3-hydroxy-3-methyl-glutaryl-CoA reductase;HMGR;EC1.1.1.34)是控制甲戊二羥酸通路的關(guān)鍵的酶,調(diào)節(jié)膽固醇和類異戊二烯脂分子的產(chǎn)生。HMG-COA還原酶位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上,含有8個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域,其中活性結(jié)構(gòu)域在細(xì)胞漿里。HMG-COA還原酶是許多降脂藥物的靶標(biāo),包括lovastatin (Mevacor)、atorvastatin (Lipitor)、pravastatin(Pravachol)和simvastatin(Zocor)。在植物組織中,HMG-COA還原酶位于質(zhì)體、線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上,含有2個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域,組織發(fā)育、光照、病原菌感染、創(chuàng)傷等將誘導(dǎo)HMG-COA還原酶活性增加。在HMG-COA還原酶的催化下,將4個(gè)電子的3-羥-3-甲戊二酰輔酶A(HMG-COA)還原為甲戊二羥酸(mevalonate),同時(shí)產(chǎn)生還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate;NADPH)被氧化為氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(oxidized nicotinamide adenine dinucleotide phosphate;NADP),其氧化后的吸光峰值變化(340nm 波長),來定量分析3-羥-3-甲戊二酰輔酶A(HMG-COA)還原酶的活性。

3-羥-3-甲戊二酰輔酶AELISA試劑盒主要用途:
3-羥-3-甲戊二酰輔酶A(HMG-COA)還原酶活性直接光度法定量檢測試劑是一種旨在運(yùn)用3-羥-3-甲戊二酰輔酶A作為底物,在還原酶的催化下,還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化后吸光峰值的降低,即采用光度法來測定植物裂解樣品中酶活性的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種植物組織,包括種子(seed)、葉片(leaf)、根(root)、胚胎葉(cotyledon)、上胚軸(epicotyl)等裂解懸液、微粒體,或純化酶樣品3-羥-3-甲戊二酰輔酶A(HMG-COA)還原酶的活性檢測,以及抑制劑篩選。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定。

3-羥-3-甲戊二酰輔酶AELISA試劑盒注意事項(xiàng):
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4.請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計(jì)算時(shí)請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。

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