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上海紀(jì)寧實(shí)業(yè)有限公司

牛免疫球蛋白A(IGA)ELISA試劑盒的操作步驟

時(shí)間:2022-5-11閱讀:814
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牛免疫球蛋白A(IGA)ELISA試劑盒用于測定血清,血漿及相關(guān)液體樣本中牛免疫球蛋白A(IgA)含量。


實(shí)驗(yàn)原理

是采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA),往預(yù)先包被牛免疫球蛋白A(IGA)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌,用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的,顏色的深淺和樣品中的牛免疫球蛋白A(IGA)呈正相關(guān),用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計(jì)算樣品免疫球蛋白A(IGA)的濃度。


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牛免疫球蛋白A(IGA)ELISA試劑盒操作步驟:

1.取出試劑盒,室溫(20-25℃)放置30分鐘。


2.分組:取出96孔板,根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理,分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品組(6個(gè)濃度)、空白孔、待測樣品組。

注:為減少實(shí)驗(yàn)誤差,保證準(zhǔn)確性,建議設(shè)置復(fù)孔。


3.加樣:依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入50ul的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中,空白對照孔加入50ul的蒸餾水,其余微孔中加入50ul的待測樣本。


4.加酶標(biāo)溶液:標(biāo)準(zhǔn)品組、待測樣本組各孔中加入100ul的酶標(biāo)溶液(空白對照孔除外)。


5.溫育:酶標(biāo)板用封板紙密封后,放入濕盒內(nèi)于37℃恒溫孵育1小時(shí)。


6.洗板:用稀釋后的洗滌液注滿每孔,靜置15-30s,充分清洗酶標(biāo)板5次,用吸水紙*拍干。


7.顯色:各孔加入顯色劑A液50ul后,再加入顯色劑B液50ul。


8.終止:25-37℃下避光反應(yīng)10-15分鐘,加入50ul終止液。


9.讀板:在450nm波長讀取各孔的OD值。


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