1、ELISA試劑盒的原理和類型
ELISA的根底是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶符號(hào)。在固相載體表面的抗原或抗體仍堅(jiān)持其免疫學(xué)活性，酶符號(hào)的抗原或抗體既保存其免疫學(xué)活性，又保存酶的活性。在測(cè)守時(shí)，受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反響。用洗刷的辦法使固相載體上構(gòu)成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的別的物質(zhì)分隔。再參加酶符號(hào)的抗原或抗體，也經(jīng)過反響而在固相載體上。此刻固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈必定的比例。參加酶反響的底物后，底物被酶催化變成有色產(chǎn)品，產(chǎn)品的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接有關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。因?yàn)槊傅拇呋β屎芨?，間接地?cái)U(kuò)大了免疫反響的成果，使測(cè)定辦法抵達(dá)很高的敏感度。
2、ELISA試劑盒的類型
ELISA可用于測(cè)定抗原，也可用于測(cè)定抗體。在這種測(cè)定辦法中有三個(gè)必要的試劑：（1）固相的抗菌素原或抗體，即"免疫吸附劑"（immunosorbent）；（2）酶符號(hào)的抗原或抗體，稱為"物"（conjugate）；（3）酶反響的底物。根據(jù)試劑的來歷和標(biāo)本的狀況以及檢查的具體條件，可規(guī)劃出各種不一樣類型的檢查辦法。用于查驗(yàn)的ELISA主要有以下幾種類型：
雙抗體夾心法是檢查抗原zui常用的辦法，操作過程如下：
1、將特異性抗體與固相載體聯(lián)結(jié)，構(gòu)成固相抗體。洗刷除掉未的抗體及雜質(zhì)。
2、加受檢標(biāo)本，保溫反響。標(biāo)本中的抗原與固相抗體，構(gòu)成固相抗原抗體復(fù)合物。洗刷除掉別的未物質(zhì)。
3、加酶標(biāo)抗體，保溫反響。固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體。*洗刷未的酶標(biāo)抗體。此刻固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢抗原的量有關(guān)。
4、加底物顯色。固相上的酶催化底物變成有色產(chǎn)品。經(jīng)過比色，測(cè)知標(biāo)本中抗原的量。在查驗(yàn)中，此法適用于查驗(yàn)各種蛋白質(zhì)等大分子抗原，例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只需取得對(duì)于受檢抗原的異性抗體，就可用于包被固相載體和制備酶物而建立此法。如抗體的來歷為抗血清，包被和酶標(biāo)用的抗體別離取自不一樣種屬的動(dòng)物。如使用單克隆抗體，通常挑選兩個(gè)對(duì)于抗原上不一樣決議簇的單抗，別離用于包被固相載體和制備酶物。這種雙位點(diǎn)夾心法具有很高的特異性，并且能夠?qū)⑹軝z標(biāo)本和酶標(biāo)抗體一同保溫反響，作一步檢查。
在一步法測(cè)定中，當(dāng)標(biāo)本中受檢抗原的含量很高時(shí)，過量抗原別離和固相抗體及酶標(biāo)抗體，而不再構(gòu)成"夾心復(fù)合物"。類同于沉積反響中抗原過剩的后帶景象，此刻反響后顯色的吸光值（坐落抗原過剩帶上）與規(guī)范曲線（坐落抗體過剩帶上）某一抗原濃度的吸光值一樣（拜見1.3.2，圖1-4），如按常法測(cè)讀，所得成果將低于實(shí)踐的含量，這種景象被稱為鉤狀效應(yīng)（hook effect），因?yàn)橐?guī)范曲線抵達(dá)后呈鉤狀彎落。鉤狀效應(yīng)嚴(yán)峻時(shí)，反響乃至可不顯色而呈現(xiàn)假陰性成果。因此在使用一步法試劑測(cè)定標(biāo)本中含量可反常增高的物質(zhì)（例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等）時(shí)，應(yīng)留意可測(cè)范圍的zui高值。用高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應(yīng)。
倘若在被測(cè)分子的不一樣位點(diǎn)上富含多個(gè)一樣的決議簇，例如HBsAg的a決議簇，也可用對(duì)于此決議的同一單抗別離包被固相和制備酶物。但在HBsAg的檢查中應(yīng)留意亞型疑問，HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4個(gè)亞型，盡管每種亞型均有一樣的a決議簇的反響性，這也是用單抗作夾心法應(yīng)留意的疑問。
ELISA試劑盒雙抗體夾心法測(cè)抗原的另一留意點(diǎn)是類風(fēng)濕因子（RF）的攪擾。RF是一種本身抗體，多為IgM型，能和多種動(dòng)物IgG的Fc段。用作雙抗體夾心法檢查的血清標(biāo)本中如富含RF，它可充任抗原成份，一起與固相抗體和酶標(biāo)抗體，表現(xiàn)出假陽性反響。選用F（ab'）或Fab片段作酶物的試劑，因?yàn)槿コ薋c段，然后消除RF的攪擾。雙抗體夾心法ELISA試劑是否受RF的影響，已被列為這類試劑的一項(xiàng)查核指標(biāo)（拜見6.2）。
雙抗體夾心法適用于測(cè)定二價(jià)或二價(jià)以上的大分子抗原，但不適用于測(cè)定半抗原及小分子單價(jià)抗原，因其不能構(gòu)成兩位點(diǎn)夾心。