ELISA試劑盒測(cè)定現(xiàn)一般為采用手工操作的以微孔板條為固相的測(cè)定形式，測(cè)定操作十分簡(jiǎn)略，一般涉及到標(biāo)本的搜集保留、試劑預(yù)備、加樣、溫育、洗板、顯色、比色、成果判別和成果陳述及解釋等方面，其間任一過(guò)程的不妥都會(huì)影響測(cè)定成果，且尤以加樣、溫育和洗板等過(guò)程為甚。現(xiàn)分述如下。    
一、標(biāo)本的搜集和保留    
用于ELISA測(cè)定的標(biāo)本zui為常用的是血清（漿），有時(shí)由于特定的檢查意圖，也用到唾液、腦脊液、尿液、大便等標(biāo)本。如今上運(yùn)用血清標(biāo)本測(cè)定的標(biāo)志物一般有傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標(biāo)志物、激素、特種蛋白、細(xì)胞因子和醫(yī)治藥物等。對(duì)用于激素和醫(yī)治藥物測(cè)定的血清標(biāo)本的搜集，要留意搜集時(shí)刻甚或體位有也許會(huì)對(duì)測(cè)定成果發(fā)生影響。如可的松在早晨4～6點(diǎn)之間，會(huì)有一峰值呈現(xiàn)：生長(zhǎng)激素、促黃體激素（LH）和促卵泡激素（FSH）均以陣發(fā)性辦法開(kāi)釋?zhuān)蚨?，在測(cè)定此類(lèi)激素時(shí)，有必要在親近相連的時(shí)刻間隔內(nèi)采納數(shù)份血樣本，以其間間值為測(cè)定值。又如當(dāng)從臥位變?yōu)檎玖⑽粫r(shí)，血清中腎素活性將呈現(xiàn)明顯增高。再如醫(yī)治藥物的檢查，應(yīng)根據(jù)藥代動(dòng)力學(xué)挑選服藥后的zui適時(shí)刻抽血檢查。用于傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標(biāo)志物和特種蛋白等的檢查的血清標(biāo)本的搜集則沒(méi)有時(shí)刻和體位方面的影響。 
ELISA試劑盒要思考以下幾個(gè)方面：    
（1）要留意防止呈現(xiàn)嚴(yán)峻溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán)，其有相似過(guò)氧化物的活性，因而，在以HRP為符號(hào)酶的人ELISA試劑盒測(cè)定中，如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高，則其就很簡(jiǎn)單在溫育過(guò)程中吸附于固相，然后與后邊參加的HRP底物反響顯色。    
（2）樣本的收集及血清別離中要留意盡量防止細(xì)菌污染，一則細(xì)菌的生長(zhǎng)，其所排泄的一些酶也許會(huì)對(duì)抗原抗體等蛋白發(fā)生分化效果；二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶自身會(huì)對(duì)用相應(yīng)酶作符號(hào)的測(cè)定辦法發(fā)生非特異性干擾。    
（3）血清標(biāo)本如是以無(wú)菌操作別離，則可以在2～8℃下保留一星期，如為有菌操作，則主張冰凍保留。樣本的長(zhǎng)時(shí)刻保留，應(yīng)在-70℃以下。    
（4）冰凍保留的血清標(biāo)本須留意防止因停電等形成的重復(fù)凍融。標(biāo)本的重復(fù)凍融所發(fā)生的機(jī)械剪切力將對(duì)標(biāo)本中的蛋白等分子發(fā)生破壞效果，然后引起假陰性成果。此外，凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)留意，不要進(jìn)行劇烈振蕩，重復(fù)倒置混勻即可。     
（5）標(biāo)本在保留中如呈現(xiàn)細(xì)菌污染所造成的的混濁或絮狀物時(shí)，應(yīng)離心沉積后取上清檢查。  
二、試劑預(yù)備     
在試驗(yàn)室，對(duì)試劑預(yù)備一般不太留意，一般的做法是，在試驗(yàn)時(shí)將試劑從冰箱中拿出來(lái)即用，而疏忽了這種做法有也許影響后邊溫育時(shí)刻不行的疑問(wèn)，其直接的結(jié)果是對(duì)一些弱陽(yáng)性標(biāo)本的檢查呈現(xiàn)假陰性。因而在ELISA測(cè)定中試劑的預(yù)備zui為要害的是，在試驗(yàn)開(kāi)端前，將試劑盒先從冰箱中拿出來(lái)，在室溫下放置20分鐘以上后，再進(jìn)行測(cè)定，以使試劑盒在運(yùn)用前與室溫平衡。這樣做的意圖，首要是為了在后邊的溫育反響過(guò)程中，能使反響微孔內(nèi)的溫度能較快地到達(dá)所請(qǐng)求的高度，以滿(mǎn)意測(cè)定請(qǐng)求。其次，如今的產(chǎn)品ELISA試劑盒中的洗板液均需在試驗(yàn)室運(yùn)用時(shí)對(duì)所供給的濃縮液稀釋制造，因而稀釋時(shí)所用的蒸餾水或去離子水應(yīng)保證質(zhì)量。此外，當(dāng)試劑盒以O(shè)PD為底物時(shí)，則底物溶液應(yīng)在反響顯色前暫時(shí)制造。    
三、ELISA試劑盒加血清樣本及反響試劑    
在如今的人ELISA試劑盒產(chǎn)品試劑盒中，血清樣本的參加幾乎是僅有的要運(yùn)用微量加樣器參加樣本的過(guò)程，運(yùn)用微量加樣器加樣有必要留意的要害點(diǎn)。?