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ELISA試劑盒是以免疫學(xué)反應(yīng)為根底,將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的催化效果相結(jié)合起來的一種敏感性很高的實驗技能。因為抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行,每參加一種試劑孵育后,可通過洗刷除去多余的游離反應(yīng)物,然后確保實驗成果的特異性與穩(wěn)定性。在實踐使用中,通過不一樣的規(guī)劃,詳細的辦法過程可有多種。即:用于檢查抗體的間接法(圖a)、用于檢查抗原的雙抗體夾心法(圖b)以及用于檢查小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。對比常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法。
ELISA試劑盒提示您操作時應(yīng)留心:
1、底物A應(yīng)蒸發(fā),防止經(jīng)久翻開蓋子,底物B對光活絡(luò),防止經(jīng)久露出于光下,防止用手觸摸,試驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
2、試驗中不必的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保留,防止蛻變。
3、試劑應(yīng)按標簽說明書儲存,運用前恢復(fù)到室溫,稀釋后的規(guī)范品應(yīng)丟掉,不可保留。
4、運用一次性的吸頭防止穿插污染,防止運用帶金屬的加樣器。
5、依照說明書中標明的時刻、加液的量及次序進行溫育操作。
6、不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好,不相同批號的試劑不要混用,保質(zhì)期前運用。
7、洗刷酶標板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反響孔中吸水。
8、運用潔凈的塑料容器配備洗刷液,使用前充沛混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
ELISA試劑盒用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被抗該目標抗體的微孔中依次參加標本或規(guī)范品、生物素化的抗該目標抗體、HRP符號的親和素,通過*洗刷后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的效果下轉(zhuǎn)化成終究的。色彩的深淺和樣品中的該目標呈正有關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),核算樣品濃度。
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