已經(jīng)普遍到數(shù)大學(xué)實驗室的ELISA技術(shù)，有著重復(fù)性穩(wěn)定及吸附性能好等特點。今天上海豐壽給大家?guī)砹讼嚓P(guān)實驗講座，ELISA試劑盒的五大重要點分析。
 

1. 靈敏度的要求
根據(jù)我公司技術(shù)人員的分析：如果待測樣本中目標(biāo)蛋白的濃度比較高，則對靈敏度要求相對小一些。如果待測樣本中目標(biāo)蛋白的濃度比較低，則必須考慮靈敏度的問題。試劑盒曲線上的zui小濃度是比較準(zhǔn)確的，低于這個值因為與曲線是個“S”型結(jié)構(gòu)有關(guān)，所以結(jié)果是有偏差的，是一種估算。再加上實驗誤差，所以達不到理想的效果。建議選擇試劑盒時，應(yīng)該看曲線上zui小的濃度值，而不是試劑盒上寫的靈敏度。
 

2. 標(biāo)本復(fù)查
ELISA手工檢測過程復(fù)雜，影響因素較多，即使室內(nèi)質(zhì)控在控，也可能因孔間差異而造成結(jié)果的差異，因此加大復(fù)查力度是保證結(jié)果準(zhǔn)確性的可靠方法，可疑、弱陽性標(biāo)本及少見模式的檢測結(jié)果進行復(fù)查。
3. 灰區(qū)的設(shè)置
通常情況下，ELISA定性實驗以“陽性”和“陰性”來報告結(jié)果，兩者間有一條分界線被稱為“陽性判斷值”(cut-off value，CO值)，這是定性免疫測定結(jié)果報告的依據(jù)。
    
4. 測試過程請注意：
① 建議所有的標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對照都做雙份檢測，取平均值，以減小實驗誤差。
② 試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用，不同批號的試劑不得混用。
③ 實驗嚴(yán)格按照說明書的操作進行，實驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
④ 酶標(biāo)包被板開封后如未用完，應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存。
 

5. 常用的表示結(jié)果方法
① 定性測定
② 半定量測定，結(jié)果一般以滴度表示。
③ 定量測定，即用已知量的標(biāo)準(zhǔn)品作一系列稀釋后進行ELISA測定，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果以量或單位表示。在ELISA定量檢測中每一塊反應(yīng)板都必須繪制相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。