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客戶在做抗體抗原實驗時,經(jīng)常會向我們技術(shù)部咨詢關(guān)于抗體抗原實驗影響存在哪些因素,對此我司技術(shù)做出了詳細的解答,近年來隨著免疫化學、細胞生物學和分子生物學的發(fā)展,以及各種現(xiàn)代高新技術(shù)在免疫學中的應用,使免疫學技術(shù)建立了許多微量、快速、特異、靈敏并能進行自動化檢測和數(shù)據(jù)分析處理的新方法。
? 抗原—抗體結(jié)合過程可分為兩個階段:*階段為特異性結(jié)合階段,此階段反應迅速,在數(shù)秒鐘至數(shù)分鐘內(nèi)完成,但無可見反應;第二階段為可見反應階段,歷時數(shù)分鐘至數(shù)小時,此階段易受以下因素的影響。
1)電解質(zhì) 抗原抗體結(jié)合后由親水膠體變?yōu)槭杷z體,此時易受電解質(zhì)影響。通常在抗原抗體反應中,以8.5g/L NaCl溶液作為抗原抗體的稀釋液及反應液,其中Na+和Cl-可分別中和膠體顆粒上的電荷,使膠體顆粒的電勢下降,形成可見的沉淀物或凝集物。若無電解質(zhì)存在,則不出現(xiàn)可見反應。但如果電解質(zhì)濃度過高,則會出現(xiàn)非特異性蛋白質(zhì)沉淀,即鹽析。
2)酸堿度 pH過高或過低都可影響抗原和抗體的理化性質(zhì)。例如,當pH為3左右時,可出現(xiàn)非特異性酸凝集。此時因接近細菌抗原的等電點,細菌表面蛋白或其他基團所帶的電荷消失,其間互相的排斥力喪失而導致凝集,影響試驗的可靠性。抗原抗體反應一般以pH6~pH9為宜。
3)溫度 抗原抗體反應zui適溫度為37℃。一般在15℃~40℃范圍內(nèi)進行,在此范圍內(nèi),溫度越高,分子運動速度加快,增加抗原抗體接觸機會,反應速度越快,但亦容易引起復合物解離;溫度越低,反應速度緩慢,但抗原抗體結(jié)合牢固,易于觀察。某些特殊的抗原抗體反應需要特定的溫度,如冷凝集素在4℃時與紅細胞結(jié)合,20℃以上反而解離。
適當?shù)臏囟瓤稍黾涌乖c抗體分子碰撞的機會,加快二者結(jié)合的速度??贵w抗原反應的zui適溫度為37℃。
此外,適當振蕩或攪拌也可促進抗原—抗體分子的接觸,提高結(jié)合速度。
根據(jù)抗原的性質(zhì)、結(jié)合反應的現(xiàn)象、參與反應的成分因素,可將抗原—抗體反應分為凝集反應、沉淀反應、補體參與的反應、采用標記物的抗原—抗體反應等。
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