上海紀(jì)寧生物代做免疫組化實(shí)驗(yàn)，技術(shù)穩(wěn)定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠。提供技術(shù)指導(dǎo)和售后服務(wù)，價(jià)格實(shí)惠！歡迎廣大科研客戶朋友來(lái)dian咨詢！

免疫組化代測(cè)，免疫組化試劑盒，免疫組化是應(yīng)用免疫學(xué)基本原理——抗原抗體反應(yīng)，即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過(guò)化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來(lái)確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)），對(duì)其進(jìn)行定位、定性及定量的研究，稱為免疫組織化學(xué)技術(shù)(immunohistochemistry)或免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)(immunocytochemistry)。

免疫組化（LP 法）操作步驟：
1.切片常規(guī)脫蠟至水。如需抗原修復(fù)，可在此步后進(jìn)行
⒉ 緩沖液洗 3min/2 次。
⒊ 為了降低內(nèi)源性過(guò)氧化物酶造成的非特異性背景染色，將切片放在 Hydrogen Peroxide Block 中孵育 10-15 分鐘。
⒋ 緩沖液洗 5min/2 次。
⒌ 滴加 Ultra V Block ， 在室溫下孵育 5 分鐘以封閉非特異性的背景染色。（注：孵育不要超過(guò) 10 分鐘，否則會(huì)導(dǎo)致特異性染色降低。如果一抗的稀釋液中含有 5 － 10% 正常羊血清，這一步可以省略。）
⒍ 緩沖液洗 5min/2 次。
⒎ 滴加一抗工作液 37 ℃孵育 1 － 2 小時(shí)。（具體孵育時(shí)間和溫度由試驗(yàn)者*終決定）

免疫組化試劑盒實(shí)驗(yàn)代測(cè)的操作方法
⒏ 緩沖液洗 5min/2 次。
9 ． 滴加 Primary Antibody Enhancer（增強(qiáng)子），在室溫下孵育 20 分鐘。
10 ．緩沖液洗 5min/2 次。
11 ．滴加 HRP Polymer（酶標(biāo)二抗） ，在室溫下孵育 30 分鐘。（注：HRP Polymer 對(duì)光敏感，應(yīng)避免不必要的光暴露并儲(chǔ)存在不透明的小瓶中。）
12 ．緩沖液洗 5min/2 次。
13 ．向 1ml DAB Plus Substrate （或 AEC Plus Substrate) 中滴加 1-2 滴 DAB Plus Chromogen （或 AEC Plus Chromogen），混勻后滴加到切片上，孵育 3 － 15 分鐘。（具體時(shí)間由染色深淺決定。）
14 ．自來(lái)水充分沖洗，復(fù)染，脫水，透明，封片。

免疫組化染色步驟
冰凍切片 4-8um ，室溫放置 30 分鐘后，入 4 ℃丙酮固定 10分鐘，PBS洗，5分鐘x3，用過(guò)氧化氫孵育5-10分鐘，消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性。