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我司解析細(xì)胞培養(yǎng)基預(yù)防污染的方法

時(shí)間:2020-5-6閱讀:1106
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細(xì)胞培養(yǎng)基受各種霉菌、細(xì)菌和支原體污染后,一般都較難排除或殺滅,其中以支原體更難排除,因此從預(yù)防著眼為上。

一、抗生素除菌法:用BM-1(截耳素衍生物)和BM-2(四環(huán)素衍生物)抑制支原體。

1.抗生素制備:均可用PBS配成250×濃縮液-20℃?zhèn)溆谩?/p>

2.處理:取受支原體污染的細(xì)胞,吸除培養(yǎng)液,加入含BM-1的1640培養(yǎng)液培養(yǎng)3天后,吸除培養(yǎng)液,再加入含BM-2的1640培養(yǎng)液培養(yǎng)4天,如此連續(xù)三個(gè)輪回。

3.檢測(cè):用33258熒光染色鏡檢(每個(gè)輪回末應(yīng)檢測(cè)一次)。

4.培養(yǎng):清除支原體后的細(xì)胞,在不加上述抗生素的培養(yǎng)基液中,再傳代培養(yǎng)3~4次。

5.鏡檢:如清除不*可再進(jìn)行處理至純凈為止(一般3個(gè)輪回即能被*消除),即先用含BIP培養(yǎng)液培養(yǎng)12天后,再按上述方法處理。

二、加溫除菌法

把受污染的細(xì)胞置41℃中作用5~10小時(shí)。

三、動(dòng)物體內(nèi)接種除菌法

把受支原體污染的腫瘤細(xì)胞接種在同種動(dòng)物皮下或腹腔中,借動(dòng)物免疫系統(tǒng)消滅支原體,而腫瘤細(xì)胞卻能在體內(nèi)繼續(xù)生長(zhǎng),待一定時(shí)間后,從體內(nèi)取出細(xì)胞培養(yǎng)基再進(jìn)行培養(yǎng)繁殖。

四、巨噬細(xì)胞吞噬法

從動(dòng)物腹腔采取巨噬細(xì)胞,為排除其它細(xì)胞成分,可先進(jìn)行純化,然后再加入被支原體污染的細(xì)胞培養(yǎng)液中混合培養(yǎng)。在培養(yǎng)過(guò)程中,為檢查支原體是否已被消除干凈,可利用支持物培養(yǎng)法驗(yàn)證,取出支持物逐日染色、鏡檢觀察,至支原體已被消除干凈為止。

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