在免疫酶技術(shù)中，我們首先要確定的變異因素就是酶標(biāo)記物的工作濃度。因?yàn)槊笜?biāo)記物濃度的很小變化，便可導(dǎo)致試驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生很大的波動(dòng)。另外，由于濃度過高，可使非特異性反應(yīng)增加，而濃度過低又可影響測定的敏感性。因此，正式試驗(yàn)前必須準(zhǔn)確滴定其工作濃度。

1. 酶標(biāo)記抗體的滴定方法是：將抗原（或抗體）物理吸附于固相載體上，然后將經(jīng)過一系列稀釋的酶標(biāo)抗體（或抗Ig抗體）與吸附在載體上的抗原（或抗體）起反應(yīng)，以酶與底物的顯色反應(yīng)程度來確定酶標(biāo)記抗體的效價(jià)，或稱工作濃度。

2. 其步驟為：先將抗原（或抗體）用0.05M PH9.6包被緩沖液稀釋為10μg/ml左右，于聚苯乙烯板孔內(nèi)加0.1ml，4℃一夜，次日以洗滌緩沖液洗滌3次。酶標(biāo)記抗體用1%BSA-PBS液依次稀釋成1:100，1:200，1:400，1:800，1:1600（根據(jù)據(jù)抗體的滴度而定），分別加入反應(yīng)孔中，每個(gè)稀釋度二孔，每孔0.1ml，37℃孵育1小時(shí)后洗滌。然后加底物液，每孔0.1ml，37℃10～30分鐘。以2M H２SO4 0.05ml終止反應(yīng)。

3. 結(jié)果判定主要以ELISA比色儀讀取各孔OD值，并以O(shè)D為縱座標(biāo)，結(jié)合物濃度為橫座標(biāo)，繪制滴定曲線。由曲線上查得OD值為1.0左右，且曲線斜率zui大時(shí)的酶標(biāo)抗體稀釋度，即為該標(biāo)記物的工作濃度。

上海紀(jì)寧生物科技有限公司主要經(jīng)營進(jìn)口、國產(chǎn)ELISA試劑盒、細(xì)胞、血清、抗體、金標(biāo)試劑盒、生物試劑、耗材、培養(yǎng)基、一抗、二抗、免疫酶等產(chǎn)品，是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品研發(fā)和銷售的綜合性生物科學(xué)公司,產(chǎn)品國內(nèi)大部分地區(qū)。公司專注于高品質(zhì)ELISA試劑盒的整合和研發(fā)，打造國內(nèi)的ELISA試劑盒。