ELISA試劑盒試驗室質(zhì)量管理的要素是挑選和履行適當?shù)氖覂?nèi)質(zhì)量操控(internal quality control,IQC)程序，例如根據(jù)測定項意圖質(zhì)量要求和辦法特色挑選核算學規(guī)范、操控規(guī)矩和質(zhì)控品的數(shù)目，并嚴格履行IQC程序以進步IQC的質(zhì)量。室內(nèi)質(zhì)控辦法許多，但酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)中仍首要選用Levey-Jennings質(zhì)控圖。筆者長時間從事免疫學查驗質(zhì)量管理工作。發(fā)現(xiàn)醫(yī)院、血站查驗科在實踐工作中存在一些比較遍及的問題或疑問。根據(jù)本身實踐經(jīng)驗，結(jié)合相關(guān)專著，扼要介紹如下，供試驗室參閱。
1.質(zhì)控品準預(yù)備
1.1 質(zhì)控品濃度 以需求質(zhì)控的點設(shè)值進行質(zhì)控，般在Cut-of值(即CO值，是由試劑盒供給的公式核算出的陰、陽性判別規(guī)范)鄰近選點。主張選點辦法。挑選S/CO值減去精密度測定中得到的3倍批間CV與S/CO值的乘積(意即3倍s)仍大于1的質(zhì)控血清作為判別試驗室重復(fù)性的室內(nèi)質(zhì)控點。
1.2 購買質(zhì)控品主張用戶購買質(zhì)控品進行室內(nèi)質(zhì)量操控，這樣的質(zhì)控品的穩(wěn)定性更有確保。首要項目在衛(wèi)生部臨床查驗中心都有長時間供給(北京東單大華路1號北京醫(yī)院內(nèi)衛(wèi)生部臨床查驗中心免疫質(zhì)量操控室，：1O0730)
1.3 自制質(zhì)控品的制備辦法 (1)搜集陽性血清(無顯著溶血、黃疽、脂血或污染血清)，累積到一定數(shù)量(夠本室運用6月以上)；(2)混勻，經(jīng)56℃ lO小時滅活，(3)離心或過濾，去除纖維沉淀物(4)用正常人血清或10%小牛血清PBS溶液稀釋．使S/CO值到達2～4之間(5)與定值參閱品進行比照，求測定值(6)將質(zhì)控血清按0.2～O.5毫升/支分裝、封口、貼簽，置-2O℃保存。
2.ELISA試劑盒怎么正確運用“立刻法”進行質(zhì)控不能隨意運用“立刻法”，以下情況下可運用：(1)試驗室不是每天進行ELISA項意圖查驗，而ELISA試劑盒效期短．用一批號試劑盒接連慣例檢測2O次以取得RCV數(shù)據(jù)難度較大。選用“立刻法”質(zhì)控核算辦法，只需接連測3次，即可對第3次查驗成果進行質(zhì)控；(2)在某一檢測項目開端預(yù)備展開Levey-Jennings室內(nèi)質(zhì)控，沒有完結(jié)RCV測定時運用，其意圖是盡早啟動室內(nèi)質(zhì)控，在展開lI缶床試驗的一起進行RCV測定，以便在獲取滿足數(shù)據(jù)后轉(zhuǎn)入Levey-Jennings室內(nèi)質(zhì)控。因為數(shù)據(jù)量小，質(zhì)控規(guī)矩單一，“立刻法”質(zhì)控辦法可靠性相對較差。在運用該質(zhì)控辦法時，有必要加強試驗全程監(jiān)控以確保質(zhì)量，并在獲取滿足數(shù)據(jù)后及時轉(zhuǎn)入Levey-Jennings室內(nèi)質(zhì)控。試驗室需求替換質(zhì)控品批號時，應(yīng)提早開端下一批號質(zhì)控品RCV靶值和規(guī)范差的測定，盡量防止運用“立刻法”質(zhì)控辦法。
3.質(zhì)控規(guī)矩的挑選
一般以x靶±2s為正告限，以x靶士3s為失控限(這是*的判別試驗成果是否失控的準則)，取得“慣例試驗室質(zhì)量操控圖”空圖。每次(或每天)隨患者樣本測定的質(zhì)控物值，標記在質(zhì)控圖上。分析質(zhì)控圖中每天檢測質(zhì)控標本的成果散布，判別當天檢測的成果數(shù)值是否在操控限之內(nèi)。各試驗室挑選失控*，應(yīng)根據(jù)本室條件進行選定。失控限制得太寬，幾乎不用憂慮有失控可能，這樣常將失控成果誤判為合格，使質(zhì)控失掉含義；相反，失控限制得太嚴，使太多的成果乃至合格的成果判為失控，這也使質(zhì)控失掉含義。根據(jù)本室條件，設(shè)定失控限，是室內(nèi)質(zhì)控重要的環(huán)節(jié)。Westgard多規(guī)矩質(zhì)控分析法：在質(zhì)控圖中，單純根據(jù)質(zhì)控點超出2s為正告，超出3s為失控，在臨床查驗中已顯不行。Westgard將常用的判別失控的規(guī)矩總結(jié)出許多條規(guī)矩，挑選質(zhì)控規(guī)矩時有必要統(tǒng)籌室內(nèi)質(zhì)控對失控的檢出才能及誤判失控的可能性。在免疫學查驗質(zhì)控中，主張試驗室挑選運用以下
幾種質(zhì)控規(guī)矩：(1)13s:1個質(zhì)控點落在士3s之外；(2)R4s：接連2個質(zhì)控點相差超出4s規(guī)模；(3)41s:接連4個質(zhì)控點落在同一側(cè)士1s之外；(4)7x靶：接連7個質(zhì)控點落在均值之一側(cè)；(5)7t：接連7個質(zhì)控點呈接連上升或下降，或周期性動搖改變。質(zhì)控規(guī)矩還有許多，各試驗室可根據(jù)自己的實踐情況挑選質(zhì)控規(guī)矩。
4．替換試劑批號的處理方式
因為ELIsA試劑的效期相對較短，而在冷凍條件下，免疫質(zhì)控血清效期相對較長，一個批號的質(zhì)控血清往往要幾個批號的試劑才會用完，因而試驗中常會遇到替換試劑批號后怎么處理質(zhì)控圖的問題。替換不同廠家的試劑有必要從頭核算RCV(在替換前完結(jié)RCV的測定，以免中止室內(nèi)質(zhì)控)。替換相同廠家不同批號的試劑，運用質(zhì)控血清濃度值上下相鄰的系列質(zhì)控血清驗證新批號試劑S/CO值的一致性。引薦對不同批號試劑間系列血清成果回歸方程進行比較，以取得兩批試劑間的換算因子，能夠在同一質(zhì)控圖上持續(xù)描點。當換算因子為1時，運用實測S/CO值作圖。從理論上說，兩個回歸方程經(jīng)核算學查驗差異無核算學含義時，能夠連續(xù)運用上批號質(zhì)控圖。
5.分批質(zhì)控辦法
進行大批量標本的檢測時存在批內(nèi)變異與批間變異的問題。有的試驗室每天需測驗數(shù)百人的血清樣品，運用數(shù)塊乃至數(shù)十塊微孔板這就存在同一天檢測數(shù)塊板之間的變異(批內(nèi)變異)和不同天檢測之間的變異(批間變異)的問題。引薦進行免疫試驗室室內(nèi)質(zhì)控的批內(nèi)、批間室內(nèi)質(zhì)量操控具體辦法如下(以1 ncu/ml抗-HIV舉例)。
5.1 每天進行多個酶標板檢測，每板均進行室內(nèi)質(zhì)控標本測定，核算室內(nèi)質(zhì)控標本的S/CO值，見表1。核算上表各板質(zhì)控數(shù)據(jù)均數(shù)的均值和規(guī)范差時需遵從RCV的核算準則。2o d均值的均數(shù)和規(guī)范差，即為批間變異的靶值和規(guī)范差()，以操控天間變異，也稱批間變異,以2O天的規(guī)范差的均值作為批內(nèi)規(guī)范差，以20天均值的均值作為批內(nèi)靶值()，以操控天內(nèi)不同檢測批之間的變異，也稱批內(nèi)變異。
5.2 ELISA試劑盒批內(nèi)和批問Levey-Jennings質(zhì)控圖的繪圖辦法批內(nèi)Levey-Jennings質(zhì)控圖用每個酶標板質(zhì)控S/CO值描點，以調(diào)查和操控各板之問的變異。批內(nèi)Levey-Jennings質(zhì)控圖描點描在一張質(zhì)控圖上(留意區(qū)分，作好相應(yīng)記錄)，便于調(diào)查質(zhì)控成果的會集趨勢和離散程度，也能夠按完結(jié)檢測批的先后順序描在數(shù)張質(zhì)控圖上，每天按相應(yīng)批對應(yīng)作圖。批間Levey-Jennings質(zhì)控圖用宣布陳述時現(xiàn)已完結(jié)的各個酶標板質(zhì)控S/CO值的均值描點，以操控日間變異。批間Levey-Jennings質(zhì)控圖繪圖辦法可能有不斷定的時分，如完結(jié)批或第二批時，可能不知道是否還有第三批乃至第四批(關(guān)于醫(yī)院體系尤其可能發(fā)生，因為當天標本數(shù)量不能斷定，而先完結(jié)的陳述不可能等一切標本完結(jié)檢測后才宣布)，筆者主張能夠以當時已有質(zhì)控S/CO值的均值描點，作為當時批間Levey-Jennings質(zhì)控圖，以判別已完結(jié)檢測成果的質(zhì)控狀況；當有新的質(zhì)控數(shù)據(jù)發(fā)生后，與前述質(zhì)控數(shù)據(jù)(如有失控，則應(yīng)剔除失控的質(zhì)控S/CO值),核算S/CO值均值并描點，作為新的閱覽Levey-Jennings質(zhì)控圖，以判別新完結(jié)檢測成果的質(zhì)控狀況。批間Levey-Jennings質(zhì)控圖描點與批問Levey-Jennings質(zhì)控圖描點一樣，既能夠會集在一張質(zhì)控圖上作圖，也能夠按完結(jié)檢測批的先后順序分隔作圖。