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ELISA試劑盒檢測樣品中sIL-2R含量全過程

時間:2018-1-10閱讀:879
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ELISA試劑盒檢測樣品中sIL-2R含量需預(yù)備的資料和試劑
(1)純化或重組的IL-2R蛋白(α鏈,P55,CD25,Tac抗原)(40.000u/ml)
(2)FITC符號的抗IL-2R McAb(0.2μg/ml):FITC為異硫氰酸熒光素,這兒僅作為半抗原運(yùn)用,而不作為熒光素符號。
(3)堿性磷酸酶符號的兔抗FITC抗體(酶標(biāo)抗體)
(4)對硝基苯磷酶鹽底物液;用pH9.8的二乙醇胺緩沖液溶解,配成濃度為1mg/ml。
(5)1%牛血清白蛋白-PBS(1%BSA-PBS):為封閉液點(diǎn)稀釋液
(6)不同倍比稀釋度的sIL-2R規(guī)范品:以1% BSA-PBS稀釋。
(7)洗刷液(0.05%Tween20-PBS)
(8)待測sIL-2R樣品
(9)96孔酶標(biāo)板(聚苯乙烯板),酶標(biāo)儀,波長465nm濾光片
(10)刻度吸管,毛細(xì)吸管,加樣器(頭),4℃冰箱
ELISA試劑盒檢測樣品中sIL-2R含量具體操作步驟
(1)以必定濃度的純化或重組的IL-2R(P55)蛋白包被96孔酶標(biāo)板,100ul/孔,4℃過夜(16-72h);
(2)棄包被液,用1%BSA-PBS封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn),200ul/孔,置室溫2h;
(3)用洗刷液加滿各孔置3min,然后傾去,反復(fù)洗刷3次;
(4)別離參加不同稀釋度的sIL-2R規(guī)范品及待測樣品,50μl/孔;
(5)各孔均參加FITC符號的IL-2R McAb,50μl/孔,充沛混勻后置室溫2h;
(6)同上洗刷3次;
(7)各孔均參加堿性磷酶酶符號的兔抗FITC抗體,100μl/孔,置室溫1h;
(8)同上洗刷3次;
(9)各孔均參加底物液,100μl/孔,置室溫15-30min;
(10)用酶標(biāo)儀以波長405nm測各孔OD值。
ELISA試劑盒檢測樣品中sIL-2R含量結(jié)果剖析辦法
(1)以sIL-2R規(guī)范品各稀釋度對應(yīng)的濃度值為橫座標(biāo)(X),相應(yīng)的OD值為縱座標(biāo)(Y),在一般座標(biāo)紙上制作競賽按捺規(guī)范曲線,OD值隨規(guī)范品sIL-2R濃度升高而下降。
(2)依據(jù)待測樣品所測得的OD值,在規(guī)范曲線上查得樣品sIL-2R含量。
(3)ELISA試劑盒檢測樣品中sIL-2R含量運(yùn)用本辦法時,不需要核算按捺百分率。

 

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