氮代謝系列_谷-氨酸合成酶(GOGAT)測試盒
測定方法：微量法
產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣
注 意：正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
GOGAT廣泛分布于植物中，和谷-氨酰胺合成酶共同構(gòu)成GS/GOGAT循環(huán)，參與氨同化的調(diào)控。
氮代謝系列_谷-氨酸合成酶(GOGAT)測試盒
測定原理：
GOGAT催化谷-氨酰胺的氨基轉(zhuǎn)移到α-酮戊二酸，形成兩分子的谷-氨酸；同時NADH氧化生成NAD+，340nm吸光度的下降速率可以反映GOGAT活性大小。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制：
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體20mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×2瓶，4℃保存；
粗酶液提?。?/p>
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
測定步驟：
1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測定
（1）在試劑二中加入9mL試劑一充分溶解混勻，置于37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴5min；
現(xiàn)配現(xiàn)用（配好后3h內(nèi)用完）；
（2）在微量石英比色皿或96孔板中加入20μL樣本和180μL試劑二，混勻，立即記錄340nm處20s時的吸光值A(chǔ)1和 5min20s后的吸光值A(chǔ)2，計(jì)算ΔA=A1-A2。
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