脂肪酸代謝系列_ATP檸檬酸裂解酶ACL測試盒
測定方法：微量法
產品規(guī)格：100管/96樣
注 意 ：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
ACL（EC4.1.3.8）是脂肪酸合成中的關鍵酶，其催化產生的乙酰CoA可用于脂肪酸合成和碳鏈延長、黃酮類物質合成、氨基酸合成等。
脂肪酸代謝系列_ATP檸檬酸裂解酶ACL測試盒
測定原理：
ACL在ATP和CoA存在的情況下催化檸檬酸裂解為乙酰CoA、草酰乙酸、腺苷二磷酸和磷酸鹽。蘋果酸脫氫酶進一步催化草酰乙酸和NADH生成蘋果酸和NAD+，在340nm測定NADH減少速率，計算ACL活性。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水
試劑組成和配制：
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體20mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存；
試劑三：液體2μL×1支，4℃保存；
樣本的前處理：
1、細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
3、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟：
1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節(jié)波長至340nm，蒸餾水調零。
2、樣本測定
（1）工作液的配置，將試劑二和試劑三轉移至試劑一中，充分混合溶解，置于37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴5min；（注意：可取少量試劑一至試劑二和試劑三中，充分混勻溶解后轉移至試劑一瓶中，重復2-3遍）；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。
（2）在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本和190μL工作液，混勻，立即記錄340nm處20s時的吸光值A1和 2min20s后的吸光值A2，計算ΔA=A1-A2。
環(huán)保在線