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江蘇晶美生物科技有限公司

Elisa過程材料、試劑配置

時間:2016-11-17閱讀:922
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1、ELISA板 :于EILSA的產(chǎn)品稱為ELISA板,上標準的微量滴定板為8×12的96孔式,需要購買。常用聚苯乙烯和聚氯乙烯材料。注意:聚苯乙烯材料目前只有進口,特點是孔大,加滿約300ul,此時實驗中所加各試劑(包被液、一抗、二抗、顯色液、終止液等)均為100ul體積。而聚氯乙烯多為國產(chǎn),孔較小,加滿約200ul,此時各試劑只需加50ul體積即可
2、各試劑配制 
1)包被液(PH6.3的碳酸鹽緩沖液)無水Na2CO3 0.1696g NaHCO3  0.2856g SW  100ml *溶解至4℃,一周內(nèi)使用
2)PBST配方  NaCl  8.0g  Na2HPO4.12H2O   2.9g KCl   0.2g KH2PO4   0.24g TW-20    0.5ml SW     1000ml 
3)底物緩沖液  Na2HPO4  3.682g 檸檬酸   1.02g DW    200ml 不需滅菌,4℃保存
4)3% H2O2  30%H2O2   100ml  SW  900ml
5)顯色劑  底物緩沖劑   10ml 3%H2O2     150ul OPD     15mg 其中H2O2 zui后加
6)終止液  濃硫酸:SW = 1:8  濃硫酸緩慢加入到SW 中,并攪拌散熱

1 包被:所謂37℃反應(yīng),一般取一個37℃的水浴鍋,在水面放一較大泡沫板,將ELISA板臵于泡沫板上即可,其余步驟的37℃反應(yīng)操作同此;  整個ELISA過程中所有需要較長時間等待的步驟(包被、封閉、加一抗孵育、加二抗孵育)均需要將ELISA包起來再放入冰箱或水浴鍋中,一般可直接用一次性EP手套套起來即可。 
2 洗滌:zui常規(guī)的洗滌步驟是洗滌3次,每次間隔5min,具體實驗可能會微調(diào),洗滌次數(shù)可以3-6次不等,間隔5-10min不等;  每次洗滌后要將ELISA板盡可能拍干后在進行下一步操作,尤其是每個洗滌步驟的zui后一次洗滌要盡可能拍干,拍干可在紗布、吸水紙上進行,也可以購買洗板機。 
3 顯色:配制顯色液時3%過氧化氫一定要zui后加入,加入混勻后立刻分裝到ELISA板中,即在加過氧化氫前要*完成洗滌的操作;  OPD一般在倒數(shù)第二次洗滌前加入,要留有約10min時間以確保OPD*溶解。

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