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上海酶聯(lián)生物研究所

ELISA雙抗體夾心法原理

時(shí)間:2015-6-2閱讀:308
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    雙抗體夾心法原理:固相載體上包被抗體,再加入待測(cè)抗原(可以是血清或者其它樣本),洗板(洗掉非特異性吸附),再加入酶標(biāo)抗體,再洗板(洗掉非特異性吸附),再加底物顯色。這里有幾點(diǎn)需要注意:①抗原是大分子抗原,具有2個(gè)以上的抗原表位;②包被抗體和酶標(biāo)記的抗體都是針對(duì)抗原的特異性抗體,只不過(guò)它們分別針對(duì)的是不同抗原表位,經(jīng)常被稱作一抗和二抗;③酶是催化底物顯色的,起到一個(gè)信號(hào)放大作用。
操作步驟如下:
1) 將特異性抗體與固相載體聯(lián)結(jié),形成固相抗體。洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。
2) 加受檢標(biāo)本,保溫反應(yīng)。標(biāo)本中的抗原與固相抗體結(jié)合,形成固相抗原抗體復(fù)合物。
洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì)。
3) 加酶標(biāo)抗體,保溫反應(yīng)。固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。*洗滌未結(jié)合
的酶標(biāo)抗體。此時(shí)固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢抗原的量相關(guān)。
4) 加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。通過(guò)比色,測(cè)知標(biāo)本中抗原的量。

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