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上海酶聯(lián)生物研究所

ELISA雙抗體夾心法原理

時間:2015-6-2閱讀:310
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    雙抗體夾心法原理:固相載體上包被抗體,再加入待測抗原(可以是血清或者其它樣本),洗板(洗掉非特異性吸附),再加入酶標抗體,再洗板(洗掉非特異性吸附),再加底物顯色。這里有幾點需要注意:①抗原是大分子抗原,具有2個以上的抗原表位;②包被抗體和酶標記的抗體都是針對抗原的特異性抗體,只不過它們分別針對的是不同抗原表位,經(jīng)常被稱作一抗和二抗;③酶是催化底物顯色的,起到一個信號放大作用。
操作步驟如下:
1) 將特異性抗體與固相載體聯(lián)結(jié),形成固相抗體。洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。
2) 加受檢標本,保溫反應。標本中的抗原與固相抗體結(jié)合,形成固相抗原抗體復合物。
洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì)。
3) 加酶標抗體,保溫反應。固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結(jié)合。*洗滌未結(jié)合
的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢抗原的量相關。
4) 加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。通過比色,測知標本中抗原的量。

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