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當(dāng)前位置:上海酶聯(lián)生物研究所>>技術(shù)文章>>ELISA試劑盒背景過高的處理方法
ELISA試劑盒處理這個標(biāo)題的一種辦法是運用雞或魚的正常血清。
好的封閉液應(yīng)下降非特異性,但它不應(yīng)當(dāng)與抗原、抗體或檢測試劑發(fā)作相互作用。
在試驗結(jié)束時,咱們是否能取得有意義的信息,這在很大程度上取決于成果的信噪比。
請勿運用高濃度(正常濃度為0.01-0.1%),它會下降特異,發(fā)生假陰性。
這就下降了可發(fā)生信號的抗體非特異的機會。目前主要有兩種類型的封閉液:蛋白和非離子型去污劑。
您當(dāng)然也期望抗體只與意圖蛋白吧。假設(shè)您一向被布景標(biāo)題所困擾,那么或許您該花些時刻來優(yōu)化封閉液。
假設(shè)布景過高,而您置疑洗刷不夠時,能夠測驗增加洗刷次數(shù)。
假設(shè)您的ELISA意外地碰到了高布景,那么也無需太憂慮,順次檢查ELISA體系中的組分,并掃除也許存在的標(biāo)題。
ELISA試劑盒非特異的抗體會增加布景。
不過,它的缺陷在于能與Protein A和IgG抗體相互作用。
為了避免這一點,切勿運用過多的一抗或二抗。
這種封閉液廉價、不亂,在去掉洗刷過程中的一些非特異上很有用。
假設(shè)濃渡過高,或許未稀釋,則會致使高布景。常用的蛋白封閉液包括牛血清白蛋白(BSA)、脫脂奶粉、正常血清和魚明膠。
封閉液的作用是讓不相關(guān)的蛋白占有微孔板中埋伏的位點。
ELISA試驗的原理如同很簡樸,不過乎固定抗原,增加一抗、二抗和底物,間中夾雜著洗刷和封閉。
假設(shè)您的布景過高,置疑封閉不充分,那么您能夠測驗運用更高濃度的封閉液,或適當(dāng)延伸封閉時刻。
ELISA試劑盒血清組分的內(nèi)涵多樣性可使它有用阻攔許多不同類型的分子相互作用。另一個挑選是運用蛋白和非離子型去污劑這兩種封閉液,后者可幫忙洗刷過程中的封閉。
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