ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里地滴定其作業(yè)濃度。
酶的底物及供氫體的選擇：ELISA試劑盒對供氫體的選擇懇求是價(jià)廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng)，而本身無色。
有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用，應(yīng)留心防護(hù)。
選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對于大都蛋白質(zhì)來說通常為1～10μg/ml。
有條件者應(yīng)運(yùn)用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是如今較為滿意的供氫體。底物作用一段不論何種載體，在運(yùn)用前均可進(jìn)行選擇：用等量抗原包被，在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng)，查詢其顯色反應(yīng)是不是均一性，據(jù)此判明其吸附功能是不是杰出。
包被抗體的選擇：ELISA試劑盒將抗體吸附在固相載體表面時(shí),懇求純度要好,吸附時(shí)通常懇求PH在9.0～9.6之間。
ELISA試劑盒中，各首要構(gòu)成試劑的選擇留心事項(xiàng)其間包括:
固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其方式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。如今常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。
然后再固定其它條件或選用“方陣法”(包被物、待檢樣品的參看品及酶符號(hào)抗體分別為不一樣的稀釋吸附溫度，時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,通常多選用4℃ 18～24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定：即用不一樣的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后，在其它實(shí)驗(yàn)條件相一同，查詢陽性標(biāo)本的OD值。
酶符號(hào)抗體作業(yè)濃度的選擇：首先用直接ELISA法進(jìn)行開端效價(jià)的滴定(見酶符號(hào)抗體部份)。
時(shí)間后，應(yīng)參與強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以停止反應(yīng)。
通常底物作用時(shí)間，以10-30分鐘為宜。
ELISA試劑盒底物運(yùn)用液有必要新鮮制作，尤其是H2O2在臨用前參與。