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技術(shù)文章

吉姆薩染色實驗

閱讀：293發(fā)布時間：2015-6-10

實驗材料    原位雜交玻片
試劑、試劑盒    吉姆薩染色液磷酸鈉緩沖液乙醇二甲苯
儀器、耗材    染色盤培養(yǎng)箱濾紙
實驗步驟    
1.  將顯影的玻片置于玻片架上，浸入盛有水的染色盤中。

（1）1個盤：pH6.8 10 mmol/l 磷酸鈉緩沖液，所配的25倍稀釋的吉姆薩染液。

（2）3個盤：水。

（3）脫水系列溶液：

①3個盤：分別盛50%、70%和95%乙醇。

②2個盤：盛有100%乙醇。

③3個盤：盛有二甲苯。
 
3.  在25倍稀釋的吉姆薩染液中染玻片20 s（依染色時間決定染色的強弱），將玻片在水中浸泡3次，每次2 min。

4.  連續(xù)用乙醇脫水系列溶液處理，每盤中浸泡2 min，將玻片移至二甲苯盤中，毎次浸泡2 min，共3次。
 
5.  在通風(fēng)櫥中，按如下操作壓片固定：用一平頭鑷（拿在左手），從二甲苯中取出一塊玻片，夾住磨面端置水平。加4滴Permount 的于另一端（切片所處位置），左手拿一干凈的蓋玻片，很緩慢地放在載玻片上（在加壓片固定介質(zhì)和蓋玻片前，勿使玻片變干，因微小氣泡會造成人為假象）。
 
6.  用3MM 濾紙，沿蓋玻片邊緣，小心吸去多余固片介質(zhì)/二甲苯，并擦拭載玻片背面（勿擦拭蓋玻片）。
 
7.  將玻片平放于一硬紙盒盤上，置42℃溫孵箱2天使之凝固。
 
8.  以剃須刀片小心刮去載玻片背面殘留膠乳，染料及固片介質(zhì)。用鏡頭紙或普通棉紙擦去塵埃。放入玻片盒，必要時，載玻片上再注明標(biāo)簽。

9.  顯微鏡觀察玻片，觀察時可依信號強弱，調(diào)節(jié)光亮。
收起 
注意事項    
1.  勿將玻片直立存放于玻片中，因此時固片介質(zhì)尚未凝結(jié)。


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