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單層生長細(xì)胞的免疫熒光標(biāo)記實(shí)驗(yàn)

閱讀：247發(fā)布時(shí)間：2015-05-27

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實(shí)驗(yàn)材料    單層細(xì)胞
試劑、試劑盒    PBS多聚甲醛甲醇抗體
儀器、耗材    離心機(jī)水浴鍋培養(yǎng)箱
實(shí)驗(yàn)步驟    
1.  置生長成片的單層細(xì)胞于冰上冷卻，吸去培養(yǎng)液并以4℃PBS洗滌。吸去PBS。

2.  如欲研究細(xì)胞表面抗原，則以2%PFA于冰上面定30 min。如為細(xì)胞質(zhì)抗原，則可用含0.1% Triton X-100的2%PFA于冰上固定30 min，或以*甲醇在普通冰箱的結(jié)凍室（-10~-20℃）固定15 min。
 
3.  吸去固定液，用4℃PBS洗2次（毎次5 min）。稀釋的笫一抗體于4℃用微量離心機(jī)以13 500 g 離心2 min。
 
4.  加*抗體于培養(yǎng)皿中，使其恰好覆蓋細(xì)胞，4℃溫育1 h，然后用4℃PBS洗4次（每次5 min）。
 
5.  稀釋的笫二抗體于4℃用微量離心機(jī)以13 500 g 離心2 min。
 
6.  加第二抗體于細(xì)胞上，4℃溫育4 h。然后用4℃PBS洗4次。
 
7.  若不想立即觀察細(xì)胞，則將細(xì)胞于PBS中存放。蓋好培養(yǎng)皿，以鋁箔包裹，冷藏，在24 h 內(nèi)觀察此實(shí)驗(yàn)結(jié)果是很重要的，因熒光會(huì)迅速減弱或與細(xì)胞解離。


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