實(shí)驗(yàn)方法原理 這種方法能從單個(gè)噬斑中分離出純的噬菌體部落，而且可以對(duì)噬菌體母液進(jìn)行濃度測(cè)定。
實(shí)驗(yàn)材料 大腸桿菌
試劑、試劑盒 麥芽糖培養(yǎng)基
儀器、耗材 平板微波爐試管加熱器毛細(xì)管
實(shí)驗(yàn)步驟
1. 在含0.2 %麥芽糖和10 mmol/L MgSO4的λ肉湯培養(yǎng)基培養(yǎng)大腸桿菌至飽和。加0.3 ml的大腸桿菌培養(yǎng)液到5個(gè)8 mmX80 mm的試管里。
在把加有頂層瓊脂培養(yǎng)基的瓶子放到微波爐前一定要松開(kāi)瓶蓋！
2. 在微波爐解凍狀態(tài)下溶化頂層瓊脂培養(yǎng)基，或煮沸水浴15 min。室溫下冷卻瓶子5 min，然后將加有溶化瓊脂培養(yǎng)基的瓶子放于45~50°C水浴。
3. 用SM將噬菌體溶菌液進(jìn)行連續(xù)稀釋（如100倍的稀釋)。加*個(gè)稀釋液0.1 ml到 一只大腸桿菌試管里，再加第二個(gè)稀釋液的0.1 ml到另一只試管里，其他依次稀釋。標(biāo)記好大腸桿菌/噬菌體混合物的試管，以便它們彼此不混淆。將試管放于室溫培養(yǎng)20 min。
4. 將試管移到37 °C水浴或加熱器10 min。從水浴取出試管。
5. 往每一只試管加2.5 ml的頂層瓊脂培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)使其混合，將試管內(nèi)容物倒到平板上。輕柔地傾斜平板使瓊脂糖培養(yǎng)基平鋪到整個(gè)平板表面。將平板放于37°C恒 溫箱培養(yǎng)6~12 h。
6. 從一個(gè)噬斑不太密集的稀釋平板上用無(wú)菌毛細(xì)管或牙簽挑選單個(gè)噬斑。為了以備噬斑將來(lái)使用，用毛細(xì)管切下一塊含有噬斑的瓊脂并把它彈到含1 ml的SM的試管里 （或把牙簽尖放到液體里輕輕攪動(dòng)）。如果需要，計(jì)數(shù)一個(gè)稀釋平板上的噬斑并估計(jì)在zui初的庫(kù)里感染性噬菌體數(shù)。
收起
注意事項(xiàng)
1. 所有與大腸桿菌接觸的材料都應(yīng)是無(wú)菌的。
2. 在把加有頂層瓊脂培養(yǎng)基的瓶子放到微波爐前一定要松開(kāi)瓶蓋！
3. 制備同時(shí)符合以下兩個(gè)條件的對(duì)照平板：沒(méi)被感染的大腸桿菌的菌苔和不含細(xì)胞的頂層瓊脂培養(yǎng)基。
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