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上海一研生物科技有限公司

Triton-X100的使用和血清封閉的原則

時(shí)間:2015-7-6閱讀:3846
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在什么情況下使用 Triton-X100?
 
1.Triton X-100 化學(xué)名稱為聚乙二醇辛基苯基醚,是一種去污劑。在免疫組織化學(xué)(10 μm 以上厚切片) 和免疫細(xì)胞化學(xué)中一般用 Triton X-100 作為細(xì)胞通透劑,在膜上打孔。
 
2.其作用原理:Triton X-100 可以溶解細(xì)胞膜、細(xì)胞核膜、細(xì)胞器膜上的脂質(zhì)而使抗體及大分子結(jié)構(gòu)的物質(zhì)進(jìn)入胞漿和胞核內(nèi),故在細(xì)胞免疫組化時(shí)尤為推薦使用,這樣抗體就能順利進(jìn)入胞內(nèi)與相應(yīng)抗原結(jié)合。
 
3.Triton X-100 既是一種表面活性劑,也有抗氧化作用。
 
封閉血清的選擇原則是什么?
 
1.膜上或切片上有剩余的位點(diǎn)可以非特異性吸附抗體,造成后續(xù)結(jié)果的假陽(yáng)性。
 
2.封閉血清一般是和二抗同一來(lái)源的,血清中動(dòng)物自身的抗體,預(yù)先能和組織中有交叉反應(yīng)的位點(diǎn)發(fā)生結(jié)合,否則在后面的步驟中如果和二抗發(fā)生結(jié)合,會(huì)造成背景。
 
3.也可以用小牛血清、BSA、羊血清等,但不能與一抗來(lái)源一致。

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