體外培養(yǎng)的原代細胞或細胞株要在體外持續(xù)地培養(yǎng)就必須傳代，以便獲得穩(wěn)定的細胞株或得到大量的同種細胞，并維持細胞種的延續(xù)。培養(yǎng)的細胞形成單層匯合以后，由于密度過大生存空間不足而引起營養(yǎng)枯竭，將培養(yǎng)的細胞分散，以1：2或1：3以上的比率轉(zhuǎn)移到另外的容器中進行培養(yǎng)，即為傳代培養(yǎng)。細胞“一代”指從細胞接種到分離再培養(yǎng)的一段期間，細胞倍增3～6次。細胞傳代后，一般經(jīng)過j個階段：游離期、指數(shù)增生期和停止期。

一、材料

1．標本80％或接近匯合成片的細胞。

2．試劑硝化液、PBS、培養(yǎng)液。

3．器具吸管、離心管、培養(yǎng)瓶、*。

二、操作步驟

1．在超凈工作臺中吸出培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)液。

2．加入少許消化液，以液面覆滿平底為宜，輕輕搖動培養(yǎng)瓶，消化液鋪滿所有細胞表面。

3．如果在倒置鏡下觀察被消化的細胞，細胞質(zhì)回縮，細胞變圓，細胞間隙增大，立即終止消化。

4．吸出消化液，加入3～5ml新鮮培養(yǎng)液，用吸管反復吹打瓶壁上的細胞，吹打時要按順序進行，以確保所有瓶壁均吹打到，吹打時動作要輕柔，不要用力過大，盡可能不要出現(xiàn)泡沫，以避免細胞的機械損傷，制成細胞懸液。

5．用計數(shù)板計數(shù)，計算細胞的濃度，用培養(yǎng)液調(diào)整適當?shù)募毎麧舛群笤俜制颗囵B(yǎng)。一般情況，傳代后的細胞在2h左右就能附著在培養(yǎng)瓶壁上，2～4d就可在瓶內(nèi)形成單層，需要再次進行傳代。