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人類淋巴母細(xì)胞建株方法

時(shí)間:2015-6-19閱讀:391
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人類淋巴母細(xì)胞建株方法

l、4ml肝素抗凝血于離心管中,加入2ml RPMI 1640。

2、混勻后沿管壁緩慢加到預(yù)置有4ml淋巴細(xì)胞分離液的液面上靜置30min。

3、1500rpm,15min,吸取白細(xì)胞層(第二層)于另一離心管中。

4、加RPMI 1640 5ml洗滌白細(xì)胞兩次。

5、將白細(xì)胞接種至1ml RPMI 1640培養(yǎng)基中,加入10μl環(huán)胞霉素和100μl的EB(EB病毒)液,混勻。

6、水浴搖床,40次/分,37℃,3hr。

7、1500rpm,15min。將細(xì)胞接種至1ml培養(yǎng)基中(內(nèi)含*1mM/ml)加入10μl環(huán)胞霉素,輕輕混勻,37℃培養(yǎng)。

8、5天后觀察細(xì)胞轉(zhuǎn)化和生長(zhǎng)情況,決定是否半量換液。一般半量換液l—2次,并維持環(huán)胞霉素的濃度。

9、待轉(zhuǎn)化細(xì)胞數(shù)量明顯上升,并出現(xiàn)細(xì)胞團(tuán)塊后,可轉(zhuǎn)入25ml細(xì)胞培養(yǎng)瓶中,加1—2ml培養(yǎng)基,37℃培養(yǎng)10—15天,一般每隔3—4天觀察一次,決定是否換液,傳代。

10、細(xì)胞生長(zhǎng)達(dá)一定數(shù)量后凍存,凍存前應(yīng)進(jìn)行核型分析和存檔。

英文名稱 Rattus norvegicus (Rat) 轉(zhuǎn)化受體電位陽離子通道亞家族M成員6(TRPM6)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 規(guī)格: 48T/96T
英文名稱 Mus musculus (Mouse) 轉(zhuǎn)化受體電位陽離子通道亞家族M成員4(TRPM4)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 規(guī)格: 48T/96T
英文名稱 Rattus norvegicus (Rat) 轉(zhuǎn)化受體電位陽離子通道亞家族M成員4(TRPM4)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 規(guī)格: 48T/96T
英文名稱 Homo sapiens (Human) 轉(zhuǎn)化受體電位陽離子通道亞家族M成員1(TRPM1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 規(guī)格: 48T/96T
英文名稱 Homo sapiens (Human) 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β誘導(dǎo)蛋白(TGFβI)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 規(guī)格: 48T/96T
細(xì)胞英文名稱 Mus musculus (Mouse) 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β誘導(dǎo)蛋白(TGFβI)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 規(guī)格: 48T/96T
英文名稱 Bos taurus; Bovine (Cattle) 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β誘導(dǎo)蛋白(TGFβI)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 規(guī)格: 48T/96T

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