(一)貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的換液)

    初代培養(yǎng)成功，由于營(yíng)養(yǎng)缺乏，代謝產(chǎn)物增多，細(xì)胞未達(dá)到飽和密度，仍需繼續(xù)培養(yǎng)，因此，需采取換液方式來更新營(yíng)養(yǎng)成分以滿足細(xì)胞繼續(xù)生長(zhǎng)繁殖的需要。其換液方法比較簡(jiǎn)單．即棄去舊液，加人與原培養(yǎng)液相同的等量*培養(yǎng)基。

(二)懸浮細(xì)胞

1.淋巴細(xì)胞的短期培養(yǎng)無需換液，但加人生長(zhǎng)因子或有絲分裂原(PHA、PMA、co一nA、PWM、LPS等)后，細(xì)胞不僅會(huì)發(fā)生轉(zhuǎn)化而且會(huì)發(fā)生分裂繁殖，此時(shí)培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)或分并不能維持細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)需求，代謝產(chǎn)物增多，細(xì)胞不適宜生長(zhǎng)，需進(jìn)行換液。

2．白血病細(xì)胞或淋巴瘤細(xì)胞體外長(zhǎng)期培養(yǎng)時(shí)，采用半量換液的方式，待達(dá)到飽和密度時(shí)才能傳代。半量換液的方法如下：

(1)將原培養(yǎng)瓶豎起，在30min內(nèi)，若細(xì)胞沉于瓶底，可用吸管輕輕吸去一半上清液棄去，再加入等量的新鮮*培養(yǎng)基。

(2)細(xì)胞不能沉于瓶底，可吸出細(xì)胞懸液，采用低速離心(1000r／min 10min)棄去一半上清液加入等量的新鮮*培養(yǎng)基，混勻后再轉(zhuǎn)入原瓶繼續(xù)培養(yǎng)。

三、初代細(xì)胞培養(yǎng)的傳代

    初代培養(yǎng)后由于貼壁細(xì)胞的相互匯合，使整個(gè)瓶底逐漸被細(xì)胞覆蓋；懸浮細(xì)胞增殖，數(shù)量增加甚至達(dá)飽和密度，細(xì)胞難以繼續(xù)生長(zhǎng)繁殖，需要進(jìn)行分瓶培養(yǎng)，這種使原代細(xì)胞經(jīng)分散接種的過程稱之為傳代。每進(jìn)行一次分離再培養(yǎng)稱之為傳一代，傳至5～10代以內(nèi)的細(xì)胞通常稱為次代培養(yǎng)細(xì)胞，傳至10～20代以上的細(xì)胞，通常確定為傳代細(xì)胞(或稱傳代細(xì)胞系)，初代培養(yǎng)的傳代是關(guān)鍵。應(yīng)注意如下幾點(diǎn)：

1．初代培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)密度不高時(shí)，或未能達(dá)到覆蓋整個(gè)瓶底時(shí)不能急于傳代。

2．初代培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞多為混合細(xì)胞，形態(tài)各異，往往是上皮樣細(xì)胞和成纖維樣細(xì)胞并存，采用*消化時(shí)要掌握好消化時(shí)間。

3．吹打已消化的細(xì)胞要輕巧，以盡可能減少對(duì)細(xì)胞的機(jī)械損傷。

4．傳代時(shí)細(xì)胞接種數(shù)量要多一些，以利于細(xì)胞的生存和繁殖。如果消化分離的細(xì)胞懸液有組織塊，也一并傳人到培養(yǎng)瓶，盡量減少細(xì)胞損失。