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淋巴細(xì)胞數(shù)量與功能檢測(cè)

時(shí)間:2016-2-1閱讀:1893
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    淋巴細(xì)胞及其功能檢測(cè)常用于對(duì)機(jī)體免疫狀態(tài)進(jìn)行評(píng)估及對(duì)疾病療效的監(jiān)控。

(一)淋巴細(xì)胞數(shù)量檢測(cè)

1.T細(xì)胞數(shù)量檢測(cè) 常用間接免疫熒光法,檢測(cè)T細(xì)胞表面的CD3、CD4、CD8,來 了解外周血T細(xì)胞數(shù)量及亞群的變化。外周血T細(xì)胞亞群正常值為CD3+T細(xì)胞占60%~ 80%,CD4+T細(xì)胞占55%~ 60%,CD8+T細(xì)胞占20 ~ 30%,CD4+/C D8+T細(xì)胞比值一般為2∶1。

2.B細(xì)胞數(shù)量檢測(cè) 常用直接免疫熒光法,檢測(cè)B細(xì)胞表面Sm Ig 來了解成熟B細(xì)胞的數(shù)量。正常人外周血Sm Ig +細(xì)胞一般為8% ~ 12%。

(二)淋巴細(xì)胞功能檢測(cè)

1.T細(xì)胞功能檢測(cè) 常用的檢測(cè)方法有淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)(又稱淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn))、細(xì)胞毒試驗(yàn)及細(xì)胞因子檢測(cè)。

(1)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn):T細(xì)胞在體外受特異性抗原物質(zhì)或非特異性絲裂原(如 PHA、ConA 等)刺激后,能轉(zhuǎn)化為體積大、代謝旺盛且能進(jìn)行分裂的淋巴母細(xì)胞。T細(xì)胞的這種轉(zhuǎn)化(或增殖)可分別用形態(tài)觀察法、3H-TdR(氚標(biāo)記胸腺嘧啶核苷)摻入法及MTT法檢測(cè)。正常人的T細(xì)胞轉(zhuǎn)化率為70%左右。

(2)細(xì)胞毒試驗(yàn):Tc細(xì)胞、NK細(xì)胞對(duì)其靶細(xì)胞有直接殺傷作用。根據(jù)待檢效應(yīng)細(xì)胞的性質(zhì),選用相應(yīng)的靶細(xì)胞如腫瘤細(xì)胞、移植供體細(xì)胞等共同培養(yǎng),然后測(cè)定效應(yīng)細(xì)胞的殺傷活性。常用方法有:51Cr釋放法、凋亡細(xì)胞檢測(cè)法。

(3)細(xì)胞因子檢測(cè)法 不同T細(xì)胞亞群分泌細(xì)胞因子不同,因此,根據(jù)細(xì)胞因子種類可間接反映T細(xì)胞亞群的功能。檢測(cè)細(xì)胞因子常用的方法有ELISA、生物活性測(cè)定法、PCR。(4)皮膚試驗(yàn) 正常機(jī)體對(duì)某種抗原建立的細(xì)胞免疫與遲發(fā)型超敏反應(yīng)往往同時(shí)存在,故測(cè)定機(jī)體對(duì)某種抗原的遲發(fā)型超敏反應(yīng)可間接反映出機(jī)體的細(xì)胞免疫功能,如結(jié)核菌素(OT)試 驗(yàn)等。

2.B細(xì)胞功能檢測(cè) 用于檢測(cè)B細(xì)胞功能的方法有B細(xì)胞增殖試驗(yàn)和抗體形成細(xì)胞測(cè)定法。

(1)B細(xì)胞增殖試驗(yàn):B細(xì)胞受絲裂原(如 LPS、SPA等)刺激后,可進(jìn)行分裂增殖成為淋巴母細(xì)胞。檢測(cè)3H-TdR摻入率可判斷B細(xì)胞增殖的能力。

(2)抗體形成細(xì)胞測(cè)定:常用溶血空斑試驗(yàn),即測(cè)定對(duì)羊紅細(xì)胞上的抗原產(chǎn)生抗體形成細(xì)胞數(shù)目。其基本原理是抗體形成細(xì)胞分泌的免疫球蛋白與羊紅細(xì)胞上的抗原結(jié)合,在補(bǔ)體參與下,出現(xiàn)溶血反應(yīng)。周圍有溶血空斑出現(xiàn)的細(xì)胞即為抗體形成細(xì)胞,溶血空斑數(shù)即為抗體形成細(xì)胞數(shù)。

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