質(zhì)粒DNA的純化
聚乙二醇沉淀法質(zhì)粒DNA 
氯化銫－溴化乙錠梯度平衡離心法純化閉環(huán) DNA

（一）聚乙二醇沉淀法提取質(zhì)粒DNA 

1）將核酸溶液所得]轉(zhuǎn)入15mlＣorex 管中， 再加3ml 用冰預(yù)冷的5mol/L LiCl溶液，充分混勻，用合適轉(zhuǎn)頭于4℃下以10 000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘。LiCl可沉淀高分子RNA。ELISA試劑盒 

2）將上清轉(zhuǎn)移到另一 30mlCorex管內(nèi)，加等量的異丙醇， 充分混勻， 用SorvallSS34轉(zhuǎn)頭（或與其相當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)尖）于室溫以10 000轉(zhuǎn)/分離心10分釧， 回收沉淀的核酸。 

3）小心去掉上清，敞開管口，將管倒置以使zui后殘留的液滴流盡。于室溫用70％乙醇洗滌沉淀及管壁，流盡乙醇，用與真空裝置相連的巴其德吸管吸去附于管壁的所有液滴，敞開管口并將管侄置，在紙巾上放置幾分鐘，以使zui后殘余的痕量乙醇蒸發(fā)殆盡。 

4）用500μl含無 DNA酶的胰RNA酶(20μg/ml ）的TE（pH8.0）溶解沉淀，將溶液轉(zhuǎn)到一微量離心管中，于室溫放置30分鐘。 

5）加500μl含 13％（w/v)聚乙二醇（PEG 8000）的1.6mol/L NaCl,充分混合，用微量離心機(jī)于4℃以12000g離心5分鐘，以回收質(zhì)粒DNA。ELISA試劑盒 

6）吸出上清，用400μl TE(pH8.0)溶解質(zhì)粒DNA沉淀。用酚、酚：氯仿、氯仿各抽1次。 

7）將水相轉(zhuǎn)到另一微量離心管中，加100μl 10mol/L乙醇銨，充分混勻，加2倍體積（約1ml）乙醇，于室溫放置10分鐘，于4℃以12 000g離心5分鐘，以回收沉淀的質(zhì)粒DNA。 

8）吸去上清，加200μl處于4℃以12 000g離心2分鐘。 

9）吸去上清，敞開管口，將管置于實(shí)驗(yàn)桌上直到zui后可見的痕量乙醇蒸發(fā)殆盡。 10）用500μl TE（pH8.0）溶解沉淀1:100稀釋[用TE（pH8.0)] 后測(cè)量OD 260，計(jì)算質(zhì)粒DNA的濃度（1OD260＝50μg質(zhì)粒DNA/ml）， 然后將DNA貯于－20℃。

10）純化。ELISA試劑盒