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中級會(huì)員 | 第11年

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RAW264.7細(xì)胞培養(yǎng)總結(jié)

時(shí)間:2017/6/22閱讀:3552
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RAW264.7細(xì)胞培養(yǎng)總結(jié)
基本情況: 小鼠來源白血病毒誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞,屬于巨噬細(xì)胞,貼壁生長。

形態(tài)以類圓形和不規(guī)則為主,一般1~2個(gè)核,極少數(shù)有3個(gè)核,胞漿伸展時(shí)胞體較大。鏡下細(xì)胞為小珍珠似的圓形橢圓形。

2,培養(yǎng)情況

培養(yǎng)條件:10%FBS高糖DMEN,進(jìn)口gibco血清更好

傳代:細(xì)胞增殖較快,70%即可傳代,細(xì)胞有觸角也提示需要傳代,1:3----1:6傳代,推薦使用皿。傳代時(shí)切記不要使用*,正常情況下此細(xì)胞貼壁不牢,直接吹打即可,*消化會(huì)使細(xì)胞伸出觸角改變形態(tài)。我是直接用培養(yǎng)基吹打,也可以用PBS,感覺無差異。

凍存和復(fù)蘇:和普通細(xì)胞無異。

RAW264.7作為巨噬細(xì)胞有很強(qiáng)的吞噬能力,吞噬抗原后伸出長角,就是大家常見的偽足。同時(shí)貼壁黏附能力增強(qiáng),傳代時(shí)難以消化下來。

   該細(xì)胞貼壁時(shí)間短,成片生長,似小菌落般小片生

長,zui后連,成一片并會(huì)疊層。傳代密度不易過高或者過低,過低會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞生長緩慢甚至不生長,過高,細(xì)胞會(huì)長出偽足。

3, 關(guān)于RAW264.7分化,

正常細(xì)胞為貼壁不牢的圓形橢圓形細(xì)胞,分化后伸出偽足,貼壁能力增強(qiáng)。

避免方法,

1, 血清是進(jìn)口的真血清

2, 密度不要太高或者太低,由其是需要傳代時(shí)切不可拖延時(shí)間

3, 傳代時(shí)切不可*消化,直接吹打就能下來

4, 不要污染,包括其他細(xì)胞株的污染

 

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