ELSIA操作步驟復(fù)雜，影響反應(yīng)因素較多，PF Elisa kit特別是固相載體的包被難達(dá)到各個(gè)體之間的*，因此在定量測定中，每批測試均須用一系列不同濃度的參考標(biāo)準(zhǔn)品在相同的條件下制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。測定大分子量物質(zhì)的夾心法ELISA，標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍一般較寬，曲線zui高點(diǎn)的吸光度可接近2.0，繪制時(shí)常用半對數(shù)紙，以檢測物的濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，將各濃度的值逐點(diǎn)連接，所得曲線一般呈S形，其頭、尾部曲線趨于平坦，PF Elisa kit中央較呈直線的部分是的檢測區(qū)域。

PF Elisa kit技術(shù)操作要點(diǎn)：

1. 標(biāo)本的采取和保存。
2. 試劑的準(zhǔn)備
3. 加樣。
4. 保溫。
5. 洗滌。
6. 顯色和比色。
7. 酶標(biāo)比色儀。
8. 結(jié)果判斷。

將抗原或抗體固定在過程稱為包被(coating)。換言之，包被即是抗原或抗體結(jié)合到固相載體表面的過程。PF Elisa kit蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用于。這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、濃度等的影響。載體對不同蛋白質(zhì)的吸附能力是不相同的，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團(tuán)，故更易吸附到固相載體表面。IgG對聚苯乙烯等固相具有較強(qiáng)的吸附力，其聯(lián)結(jié)多發(fā)生在Fc段上，抗體結(jié)合點(diǎn)暴露于外，因此抗體的包被一般均采用直接吸附法。蛋白質(zhì)抗原大多也可采用與抗體相似的方法包被。當(dāng)抗原決定簇存在于或鄰近于疏水區(qū)域時(shí)，抗原與固相載體的直接吸附可使抗原決定簇不能充分暴露，在這種情況下，PF Elisa kit直接包被效果不佳，可以采用間接的捕獲包被法，即先將針對該抗原的特異抗體作預(yù)包被，其后通過抗原抗體反應(yīng)使抗原固相化。此間接結(jié)合在固相上的抗原遠(yuǎn)離載體表面，其抗原決定簇也得以充分暴露。間接包被的抗原經(jīng)固相抗體的親和層析作用，包被在固相上的抗原純度大大提高，因此含雜質(zhì)較多的抗原也可采用捕獲包被法，試驗(yàn)的特異性、敏感性均由此得以改善，重復(fù)性亦佳。間接包被的另一優(yōu)點(diǎn)是抗原用量少，僅為直接包被的1/10乃至于/100。不易吸附在聚苯乙烯載體上的非蛋白質(zhì)抗原可采用特殊的包被方式。例如，在檢測抗DNA抗體時(shí)，需用DNA作為包被抗原，而普遍的固相載體一般不能直接與核酸結(jié)合。可將聚苯乙烯板先經(jīng)紫外線照射（例如30W紫外燈，75cm照射12小時(shí)），以增加其吸附性能。固相載體先用堿性蛋白質(zhì)，如聚賴氨酸、*等作預(yù)包被，也可提高核酸的結(jié)合力。也可用親和素*系統(tǒng)作間接包被，PF Elisa kit即用親和素先包被載體，然后加入*化的DNA，這種包被方法均勻、牢固，已擴(kuò)大應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測定。

脂類物質(zhì)無法與固相載體結(jié)合，可將其在有機(jī)溶劑（例如乙醇）中溶解后加入ELISA板孔中，開蓋置冰箱過夜或冷風(fēng)吹干，待酒精揮發(fā)后，讓脂質(zhì)自然干固在固相表面?？剐牧字贵w的ELISA試劑一般采用這種包被方式。

PF Elisa kit相關(guān)產(chǎn)品*：xyA648Ra    大鼠Smad同源物7(Smad7)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Mothers Against Decapentaplegic Homolog 7 (Smad7)    檢測范圍： 10.358-1000pg/ml    
xyA647Ra    大鼠Smad同源物1(Smad1)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Mothers Against Decapentaplegic Homolog 1 (Smad1)    檢測范圍： 10.358-1000pg/ml    
xyA693Ra    大鼠27kDa熱休克蛋白(HSPB1)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Heat Shock 27kDa Protein 1 (HSPB1)    檢測范圍： 10.358-1000pg/ml    
xyA639Ra    大鼠Ⅰ型膠原交聯(lián)氨基端肽(NTXⅠ)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Cross Linked N-opeptide Of Type I Collagen (NTXI)    檢測范圍： 10.358-1000pg/ml    
xyA728Ra    大鼠環(huán)加氧酶1(PTGS1)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Prostaglandin Endoperoxide SynthaHZ 1 (PTGS1)    檢測范圍： 10.358-1000pg/ml    
xyA646Ra    大鼠骨形成蛋白6(BMP6)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Bone Morphogenetic Protein 6 (BMP6)    檢測范圍： 10.358-1000pg/ml    
xyA651Ra    大鼠透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白1(HABP1)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Hyaluronan Binding Protein 1 (HABP1)    檢測范圍： 10.358-1000pg/ml    
xyA929Ra    大鼠*結(jié)合蛋白4(RBP4)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Retinol Binding Protein 4, Plasma (RBP4)    檢測范圍： 10.358-1000pg/ml    
xyA653Ra    大鼠骨形成蛋白1(BMP1)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Bone Morphogenetic Protein 1 (BMP1)    檢測范圍： 10.358-1000pg/ml    
xyA991Ra    大鼠饑餓素(GHRL)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Ghrelin (GHRL)    檢測范圍： 10.358-1000pg/ml    
xyA987Ra    大鼠醛固酮合酶(ALDOS)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Aldosterone SynthaHZ (ALDOS)    檢測范圍： 10.358-1000pg/ml    
AEB264Ra    大鼠胰島素自身抗體(IAA)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Insulin Autoantibody (IAA)    檢測范圍： 10.358-1000pg/ml    
xyA223Ra    大鼠白介素1受體拮抗劑(IL1RA)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Interleukin 1 ReHZptor Antagonist (IL1RA)    檢測范圍： 10.358-1000pg/ml    
xyA955Ra    大鼠Ⅰ型前膠原(PCⅠ)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Procollagen I (PCI)    檢測范圍： 10.358-1000pg/ml    
xyA449Ra    大鼠胱天蛋白酶7(CASP7)ELISA試劑盒    ELISA Kit for CaspaHZ 7 (CASP7)    檢測范圍： 10.358-1000pg/ml    
xyA215Ra    大鼠Ⅰ型膠原α2(COL1α2)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Collagen Type I Alpha 2 (COL1a2)    檢測范圍： 10.358-1000pg/ml    
xyA702Ra    大鼠硫氧化還原蛋白(Trx)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Thioredoxin (Trx)    檢測范圍： 10.358-1000pg/ml    
xyA933Ra    大鼠內(nèi)凝集蛋白1(ITLN1)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Inectin 1 (ITLN1)    檢測范圍： 10.358-1000pg/ml    
xyA704Ra    大鼠載脂蛋白E(APOE)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Apolipoprotein E (APOE)    檢測范圍： 10.358-1000pg/ml    
xyA217Ra    大鼠α1-微球蛋白(α1M)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Alpha-1-Microglobulin/Bikunin Precursor (a1M)    檢測范圍： 10.358-1000pg/ml