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細(xì)胞感染有以下三種

時間：2016/9/12閱讀：2075

細(xì)胞感染有以下三種：
（一）細(xì)胞準(zhǔn)備
將狀態(tài)良好的目的細(xì)胞接種到24孔板，使細(xì)胞濃度為 1×105/ml 細(xì)胞，接種細(xì)胞數(shù)量因細(xì)胞的生長速度而略有不同，一般是保證第二天進(jìn)行病毒感染的時候細(xì)胞匯合率介于 50%至70%之間。
（二）病毒感染
1.感染細(xì)胞MOI 的測定MOI（Multiplicity of Infection，感染復(fù)數(shù)）是指每個細(xì)胞感染的病毒數(shù)，通常MOI 越高，病毒整合到染色體的數(shù)量以及目的蛋白的表達(dá)量越高。對于分裂活躍的細(xì)胞，比如 Hela、293 細(xì)胞，MOI=1～3 時，80%以上的細(xì)胞均表達(dá)目的基因。而對于非分裂細(xì)胞，比如原代細(xì)胞，感染效率較低。需要進(jìn)行MOI梯度摸索實(shí)驗(yàn)，選擇適合的MOI 進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
2.感染步驟
按實(shí)驗(yàn)需要將細(xì)胞鋪板（比如12孔板）；細(xì)胞數(shù)以第2天密度約50%為宜；37℃ 培養(yǎng)過夜。
對于Polybrene 可施加的細(xì)胞：準(zhǔn)備*培養(yǎng)基和 Polybrene混合物，Polybrene 終濃度為摸索得到的zui適終濃度。移去培養(yǎng)基并添加 0.5 ml Polybrene/培養(yǎng)基混合物于每孔中（適用于24 孔板，其他孔板請相應(yīng)調(diào)整體）。
對于不適用 Polybrene 的細(xì)胞，以上步驟省略，直接進(jìn)入下面步驟：
感染前，從冰箱取出并在 37℃水浴中快速融化病毒，吸去細(xì)胞原有培養(yǎng)基，將病毒原液加入細(xì)胞中，輕輕8字混勻。感染后第二天（約12小時），吸去含病毒的培養(yǎng)液，換上新鮮的*培養(yǎng)液，繼續(xù)37℃培養(yǎng)。感染后48小時，對于帶 GFP報(bào)告基因的病毒，可通過熒光顯微鏡觀測GFP表達(dá)效率，對于攜帶 Puromycin抗性基因的病毒，換上含適當(dāng)濃度的 Puromycin 的新鮮*培養(yǎng)液，篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞株。

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